运用实时荧光定量PCR技术结合DA直接测序技术检测DJ-1基因突变

应用实时荧光定量ＰＣＲ技术结合ＤＮＡ直接测序技术检测肚珍古德，

基因突变

摘要

背景

帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）是一种常见的神经退行性

疾病如果爱可以继续蔓延。其主要临床特征是行动迟缓、静止性震颤、肌强直和姿势平衡

障碍等；主要病理改变是中脑黑质多巴胺能神经元进行性坏死、

路易氏（Ｌｅ町）小体形成月中天歌词。常染体隐性遗传早发性帕金森综合征

（ａｕｔｏｓｏｍａｌ－ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ

ｅａｒｌｙ

ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｉｎ高建国，ＡＲＥＰ）是指符合常染

体隐性遗传方式不能爱你，发病年龄小于或等于４５岁的帕金森综合征蜉蝣旧梦。多

巴反应性肌张力障碍（ｄｏｐａ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｄｙｓｔｏｎｉａgoodbye to romance，ＤＲＤ）是一种少

见的遗传性锥体外系疾病，由于部分患者可以出现帕金森综合征样表

现，与发病年龄较早的ＡＲＥＰ在临床上难以区分。ｐａｒｋｉｎ，ＰＩＮＫｌ诗芬，

ＤＪ－１和ＡＴＰｌ３Ａ２基因突变能导致ＡＲＥＰ花瓷，目前已经发现了包括基因外

显子杂合缺失在内的１２种彩１基因的致病突变。在前期工作中珠玉光华，本

研究小组应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合ＤＮＡ直接测序技术对１６个

ＡＲＥＰ家系、３个ＤＲＤ家系先证者的刃１基因进行了突变检测luv me，发现

了１个驴孙梦，基因的复合杂合突变（Ａ３９Ｓ）。由于ＤＮＡ直接测序技术不

能发现基因外显子的杂合缺失或重复突变，因此为了进一步明确

刃。基因在本组ＡＲＥＰ和ＤＲＤ患者中的突变频率，有必要应用基因定

量方法结合ＤＮＡ直接测序技术进行刃１基因的突变检测广场舞最炫民族风16步。

目的

建立应用实时荧光定量ＰＣＲ检测占ｙ１基因外显子重排突变的技

术平台痛苦的人吉他谱，结合ＤＮＡ直接测序技术对本组２１个ＡＲＥＰ和６个ＤＲＤ家系先

证者进行Ｊ耵１基因突变检测厉害了我的王。

方法

采用实时荧光定量ＰＣＲ技术检测刃１基因外显子重排突变，结

合ＤＮＡ直接测序方法检测三旷Ｊ基因点突变、小片段插入或／和缺失突

变一码100准确。设置ＡＬＢ基因为内对照attack on titan，建立刃一基因和ＡＺＢ基因的标准曲线neuuuuu，

根据已建立的标准曲线计算彤。基因和爿衄基因相对于标准品的起

始拷贝数，刃。基因相对拷贝数为刃一基因相对起始拷贝数与舭口

基因相对起始拷贝数的比值。

结果

应用实时荧光定量ＰＣＲ技术对２１个ＡＲＥＰ家系和６个ＤＲＤ家系先

证者进行刃。基因外显子重排突变检测，发现三旷』基因各外显子相

对拷贝数均在０．８－１．２之间杨仁沛，在目前公认的正常参考范围之内周旭风，提示

本组患者不存在三旷一』基因各外显子的重排突变linfeng。在前期工作的基础

上，应用ＤＮＡ直接测序技术对５个ＡＲＥＰ家系和３个ＤＲＤ家系先证者

进行刃一基因点突变、小片段插入或／和缺失突变检测，发现了１

个刃一基因纯合突变：位于Ｊ耵4887王中王鉄算盘开奖结果b。基因第２号外显子２９位碱基Ｔ被

Ｃ替换（Ｔ２９Ｃ）电吉他solo，导致第１０位氨基酸由亮氨酸变为脯氨酸（ＬＩＯＰ）；

在其余４个ＡＲＥＰ家系和３个ＤＲＤ家系中未发现石¨基因突变。发现

Ⅱ

了刃一基因的３个单核苷酸多态（ｓｉｎｇｌｅ

ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ

ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ杨宗纬 最爱，

ＳＮＰ）怎样下载mp音乐，分别为ＩＶＳ４＋３０ｔ－＊ｇ、ＩＶＳ４＋４５９－＊ａ和ＩＶＳ４＋４６９－－＊ａ阿根廷别为我哭泣。

结论

建立了应用实时荧光定量ＰＣＲ检测彤一基因外显子重排突变的

技术平台勃拉姆斯第四交响曲，未发现本组ＡＲＥＰ家系存在驴Ｊ基因重排突变。发现本组

ＡＲＥＰ家系存在１个新的彩１基因突变（ＬＩＯＰ），形１基因在本组ＡＲＥＰ

中突变频率约为９．５％盖世独胆王每天一胆。发现了历ｑ基因的３个ＳＮＰ，分别为ＩＶＳ４＋３０ｔ

－＊ｇ、ＩＶＳ４＋４５９－＊ａ和ＩＶＳ４＋４６９－＊ａ郑成河卡农。

关键词实时荧光定量ＰＣＲ我的队伍向太阳，ＡＲＥＰ知否电视剧，ＤＲＤ鹤岗南山矿，刃一基因69书吧，突变分析

ＨＩ

Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ

ｆｏｒ

ＤＪ－１

ｇｅｎｅ

Ｍｕｔａｔｉｏｎ

ｂｙ

ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

ＰＣＲａｎｄ

ｄｉｒｅｃｔ

ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ

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ｄｉｓｏｒｄｅｒ

Ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ，ｍｏｓｔ

ｐａｔｉｅｎｔｓ

ｓｕｆｆｅｒｆｒｏｍ

ｂｒａｄｙｋｉｎｅｓｉａ，ｒｅｓｔｉｎｇｔｒｅｍｏｒ李敏镐资料，ｒｉｇｉｄｉｔｙ，

ａｎｄ

ｐｏｓｔｕｒａｌｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ，ＰＤ

ｎｅｕｒｏｎｓ

ｉｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ

ｂｙ

ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ

ｌｏｓｓｏｆ

ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ

ｂｏｄｉｅｓ

ｉｎ

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ｔｈｅ

ｐｒｅｓｅｎｃｅ

ｏｆ

Ｌｅｗｙ

Ａｕｔｏｓｏｍａｌ－ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ

ａ

ｎｉｇｒａ．

ｅａｒｌｙ

ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ（ＡＲＥＰ）ｒｅｆｅｒｓ

ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ

ｗｉｔｈｍｏｄｅｏｆ

ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ

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ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ

ｗｉｔｈａｕｔｏｓｏｍａｌ

ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ

ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ

ａｎｄ

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ｙｅａｒｓ

ｏｒ

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ｏｆ

ｙｏｕｎｇｅｒ

ｉｎ

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ｏｎｅ

ｏｆ

ｔｈｅａｆｆｅｃｔｅｄ

ｓｉｂｌｉｎｇｓ．

Ｄｏｐａ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ

ｄｙｓｔｏｎｉａ（ＤＲＤ）ｉｓ

ａｒａｒｅ

ｇｅｎｅｔｉｃ

ｄｉｓｅａｓｅ．ＤＲＤ

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ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｅｄ

ｂｙｐａｒｋｉｎｓｏｎｉａｎ

ｆｅａｔｕｒｅｓｉｎｓｏｍｅ

ｐａｔｉｅｎｔｓ

ｗｈｉｃｈ

ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｅｄ

ｆｒｏｍ

ＡＲＥＰ

ｂｅ

ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ．Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

ｏｆｐａｒｋｉｎ狠角，ＰＩＮＫｌ、ＤＪ－Ｉ

和ＡＴＰｌ３Ａ２

Ｃａｌｌｃａｕｓｅ

ＡＲＥＰ．１２

ＤＪ－１ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ

ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ

ｏｕｒ

ｄｅｌｅｔｉｏｎｗｅｒｅｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｉｎ

ｐａｔｉｅｎｔｓ

ｗｉｔｈ

ｅａｒｌｙ－ｏｎｓｅｔ

ＰＤ．Ｉｎ

ｗｏｒｋ2秒2年，ｐｒｏｂａｎｄｓ

ｆｒｏｍ１５ＡＲＥＰ

ｆａｍｉｌｉｅｓ

ｐｒｅｖｉｏｕｓ

ａｎｄ

４ＤＲＤ

ｆａｍｉｌｉｅｓｗｅｒｅ

ｓｃｒｅｅｎｅｄｆｏｒＤＪ－１ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

ｂｙ

ｄｉｒｅｃｔ

ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ａｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ

ｍｕｔａｔｉｏｎ（Ａ３９Ｓ）ｗａｓ

ｃｏｎｆｉｒｍｅｄｉｎ

ｄｅｌｅｔｉｏｎｓ

ｃａｎ

ｎｏｔ

ｏｎｅ

ｆａｍｉｌｙ．Ｇｅｎｅｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ

ｏｒ

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ｄｉｒｅｃｔ

ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｉｎ

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ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ

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ＤＲＤ

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ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．

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ｐｌａｔｆｏｒｍ

ｏｆ

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ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

ｗｅｒｅ

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ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．ＡＬＢ

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ｉｎｔｅｒｎａｌｓｔａｎｄａｒｄ．Ｉｎｉｔｉａｌ

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ｄｅｌｅｔｉｏｎｍｕｔａｔｉｏｎｏｆ

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ＤＪ－１

ｇｅｎｅ

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ｇｒｏｕｐ

ｏｆ

ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｏｎ

ｔｈｅｂａｓｉｓｏｆ

ｐｒｅｖｉｏｕｓ

ｗｏｒｋ中国新声代周张弛，６

ｉｎｄｅｘ

ｐａｔｉｅｎｔｓ

ｆｒｏｍ

ＡＲＥＰ

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２

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ｐａｔｉｅｎｔｓ

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ｍｕｔａｔｉｏｎｓｏｆＤＪ－１

ｇｅｎｅ

ｂｙ

ｄｉｒｅｃｔ

ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ａ

ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ

Ｔ２９Ｃ

ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｉｎｅｘｏｎ２

ｏｆ

ｔｈｅ

ＤＪ－１

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ｍｉｓｓｅｎｓｅ

ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ（ＬＩＯＰ）

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ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ（ＳＮＰ）ｗｅｒｅ

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ＩＶＳ４＋３０ｔ－－＋ｇ、

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ｏｆ

ｇｅｎｅ

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ｍｉｓｓｅｎｓｅ

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ｆｏｕｎｄ可可托海的牧羊人，Ｔｈｅ

ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ

ｏｆＤＪ－Ｉ

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ｐａｔｉｅｎｔｓ

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ＩＶＳ４＋４５９－－－＊ａ

ａｎｄ

ＩＶＳ４＋４６９－－－－－｝ａ．

ｆｏｕｎｄ．ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ

ＩＶＳ４＋３０ｔ－－－＊ｇ、

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ｗｏｒｄｓ

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ＰＣＲ，ａｕｔｏｓｏｍａｌ－－ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ

ｅａｒｌｙ

ｐａｒｋｉｎｓｏｒｔｉｓｍ

（ＡＲＥＰ），ｄｏｐａ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ

ｄｙｓｔｏｎｉａ（Ｄ砌））killyou，ＤＪ－１

ｇｅｎｅ，ｍｕｔａｔｉｏｎ

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ＭＰＴＰ

ＭＰｄ

ｍＲＮＡ

ＰＡＧＥ

ＰＢＳ

ＰＣＲ

ＰＤ

ＰＩＮＫｌ

ＳｈＩＰ

ＴＢＥ

ＴＥＭＥＤ

ＴＨ

１Ｈｓ

ＵＰＤＲＳ

英文缩略词

Ａｕｔｏｓｏｍａｌｄｏｍｉｎａｎｔ

常染体显性遗传

Ａｕｔｏｓｏｍａｌ

ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ

常染体隐性遗传

ａｌｂｕｍｉｎ

白蛋白

Ａｕｔｏｓｏｍａｌ

ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ

ｅａｒｌｙ－ｏｎｓｅｔ

常染体隐性遗传早发性帕金森

ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ

综合征

ｃｏｐｙ－ｎｕｍｂｅｒ

ｖａｒｉａｔｉｏｎ

基因拷贝数变异

ｃｙｃｌｅ

ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ

循环阈值

Ｄｏｐａ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ

ｄｙｓｔｏｎｉａ

多巴反应性肌张力障碍

ｅａｒｌｙ－ｏｎｓｅｔ

ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ

早发性帕金森综合征

ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕ

ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ

荧光原位杂交

ｇｅｎｏｍｅ

ＤＮＡ

基因组脱氧核糖核苷酸

ＧＴＰ

ｃｙｃｌｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ

Ｉ

ＧＴｐ环化水解酶Ｉ

ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ

特发性帕金森病

Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ

ｌｉｇａｔｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｂｅ

多重连接依赖探针扩增法

ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ

Ｉ－ｍｅｔｈｙｌ－４－ｐｈｅｎｙｌ・１＇２，３，６－ｔｙｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒｉ

ｌ－甲基４苯基．１，２stay with my heart，３，６．四氢毗啶

ｄｉｎｅ

ｍａｇｎｅｔｉｃ

ｒｅｓｏｎａｎｃｅ

ｉＩｎａｇｍｇ

磁共振成像

ｍｅｓｓａｇｅ

ＲＮＡ

信使核糖核苷酸

ｐｏｌｙａｅｒｙｌａｍｉｄｅ

ｇｅｌ

ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ

聚丙烯酰胺凝胶电泳

ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄ

ｓａｌｉｎｅ

磷酸缓冲盐溶液

ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ

ｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ

聚合酶链式反应

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ

ｄｉ∞黜

帕金森病

ＰＴＥＮ・ｉｎｄｕｃｅｄ

ｐｕｔａｔｉｖｅ

ｋｉｎａｓｅ

ｌ

ＰＴＥＮ诱导的激酶１

ｓｉｎｇｌｅ

ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ

ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ

单核苷酸多态

Ｔｒｉｓ－ｂｏｒａｔｅ／ＥＤＴＡ

Ｔｒｉｓ．硼酸／ＥＤＴＡ缓冲液

Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ

Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’．四甲基乙二胺

ｔｙｒｏｓｉｎｅ

ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ

酪氨酸羟化酶

Ｉｒｉｓ・ｈｙｄｒｏｘｙ－ｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｃｔｈａｎｅ

三羟甲基氨基甲烷

ｕｎｉｆｉｅｄ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ

ｄｉｓｅａｓｅ

ｒａｔｉｎｇ

ｓｃａｌｅ

帕金森病统一评分量表

ＶｌＩＩ

硕士学位论文第一章前言

第一章前言

帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ

ｄｉｓｅａｓｅ赵四喊麦，ＰＤ）是一种常见的神经退行性疾病。其主要临

床特征是静止性震颤、肌强直、运动减少和姿势平衡障碍等；主要病理改变是中

脑黑质多巴胺能神经元进行性变性坏死various artists，残存神经元中路易氏（Ｌｅｗｙ）小体形

成【”海馨。帕金森病的发病机制尚不清楚非走不可，可能涉及到遗传缺陷［２１、氧化应激与线粒

体缺陷、兴奋性氨基酸毒性作用、环境毒素作用【３】等多种因素如鲸向海。越来越多的证据

表明eye of the tiger，帕金森病与遗传因素有关给我一首歌的时间歌词。流行病学调查研究显示疯狂的赛车插曲，约１０．１５％的帕金森

病患者有家族史【４】。而近年来大惊小怪歌词，大家系的连锁分析和越来越多的遗传性ＰＤ基因的

克隆更是为ＰＤ的发病机制研究提供了崭新的思路。到目前为止，至少发现有１１

个基因位点与ＰＤ连锁远方的家边疆行全集下载，有７种基因的突变能引起家族性帕金森病（综合征）

（ａ－ｓｙｎｕｄｅｉｎ、ｐａｒＭｎ，ＵＣＨＬ－１，ＰＩＮＫｌ，ＤＪ－１george benson，上足昆磁以及４７＇Ｐ，鲥∞【５】‘【ｌｌ】。其

中小红花儿歌，ｐａｒＭｎ、ＰＩＮＫｌ，ＤＪ－１和ＡＴＰｌ３Ａ２与常染体隐性遗传早发性帕金森综合征

（ａｕｔｏｓｏｍａｌ－ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ

ｅａｒｌｙ

ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ，ＡＲＥＰ）【６】ｉｓ］嘲【¨１有关。ＡＲＥＰ是指符合

常染体隐性遗传方式吴映香，发病年龄小于或等于４５岁的帕金森综合徂１２１张莹莹。

多巴反应性肌张力障碍（Ｄｏｐａ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｄｙｓｔｏｎｉａ，ＤＲＤ）是一种少见的遗传

性锥体外系疾病宝宝睡眠曲，它的患病率约为０．０５．０．１／１０万【”】。按遗传方式不同渴望歌词，ＤＲＤ可呈

常染体显性遗传和常染体隐性遗传幸运儿几米。大多数ＤＲＤ呈常染体显性遗传，少数

呈常染体隐性遗传【１４１。目前的研究发现常染体显性遗传ＤＲＤ的致病基因为

编码ＧＴＰ环化水解酶Ｉ（ＧＴＰ

ｃｙｅｌｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ

Ｉ，ＧＣＨｌ）的ＧＣＨＩ基斟”ｌ日光倾城 卡奇社，常染

体隐性遗传ＤＲＤ的致病基因为编码酪氨酸羟化酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅ

ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，１＂Ｉ－Ｉ）的

ＴＨ基因【１６ｌ。ＤＲＤ的特点是累及四肢的、昼夜波动的肌张力障碍。小剂量的左旋

多巴对绝大多数患者有很好的疗效【１７１。ＤＲＤ的临床表现多样记忆是阵阵花香，包括轻微的局灶

性的肌张力障碍、脑瘫样的肌张力障碍、全身广泛性的肌张力障碍和帕金森综合

征【１８】王心凌 睫毛弯弯。因为ＤＲＤ能出现包括肌强直、运动迟缓、姿势反射消失等帕金森样症状，

而Ａｌ砸Ｐ可有肌张力障碍、症状晨轻幕重等特点，两者在临床上有时很难区分１１９】直至消失天与地。

因此，在本研究中我们将临床诊断为ＤＲＤ的患者也纳入为研究对象神龙教。

ＤＪ－Ｉ基因定位于ｌｐ３６，跨越２４ｋｂ棒球大联盟主题曲，包含８个外显子军港之夜，前两个外显子不编码氨

硕士学位论文

第一章前言

基酸且被可变剪切。目前已知的ＤＪ－１基因突变包括错义突变、截短突变、剪切位

点突变，还包括常规ＤＮＡ直接测序不能检测出的杂合缺失突变等（见表１．１）【９１１２０］绝世小攻歌词。

【２ｓ】莫海婧。在前期工作中智取威虎山下载，本研究小组【２６１唧应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合ＤＮＡ直接

测序技术对１６个ＡＲＥＰ家系、３个－ＤＲＤ家系先证者的ＤＪ－１进行突变检测，发现了１

个复合杂合突变（Ａａ９Ｓ）。另外，还发现了６个ＤＪ－１基因多态：其中１个是位于ＤＪ－１

基因启动子区的１８ｂｐ碱基缺失多态（ｇ．１６８－１８５ｄｅｌ）；另外５个单核苷酸多态（ｓｉｎｇｌｅ

ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ

ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ飞到你身边，ＳＮＰ）均位于内含子区，分别为ＩＶＳｌ．１５ｔ＿÷ｃ、

ＩＶＳ４＋３０ｔ－－－，ｇ、Ⅳｓ４“５９—＋ａ、Ⅳｓ４＋４６旷ａ和ⅣＳ５＋３１９＿＋ａ。由于ＤＮＡ直接测序

技术不能发现基因外显予的杂合缺失或重复突变，因此为了进一步明确ＤＪ－Ｉ基因

在本组ＡＲＥＰ和ＤＲＤ患者中的突变频率爵士情人乐团，有必要应用基因定量方法结合ＤＮＡ直接

测序技术进行及，－Ｊ基因的突变检测刘欢的好汉歌。

目前，人们发现基因的拷贝数变异（ｃｏｐｙ－ｎｕｍｂｅｒｖａｒｉａｔｉｏｎ十八摸，ＣＮＶ）在人类基

因组中广泛存在最佳歌手。某些基因的重复或缺失只是良性的染体变异【２８１；而某些剂

量敏感的基因发生的ＣＮＶ可能导致一些疾病【２９】cheryl cole。在神经退行性疾病中，与ＣＮＶ

密切相关的疾病包括：ＰＤ、腓骨肌萎缩症１Ａ型［３０１、遗传性压力易感性神经病ｉ３１］、

常染体显性遗传脑白质营养不良【３２】和阿尔茨海默病（舢面ｅｉＩｎｄｓ

ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）

ｍ】等。实时荧光定量ＰＣＲ（ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ）能够有效地检测基因的重排突变。在

ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ中，随着产物的不断增加，反应过程中引入的染料或探针的荧光成

比例的变化无滤镜林俊杰，同时记录相应的循环数新年财运到，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产

物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图，这就是ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ的基本技术原

理１３４１感恩的心。荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信

号指数扩增阶段任意位置上。每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历

的循环数被称为ＣＴ值（ｔｈｒｅｓｈｏｌｄｖａｌｕｅ）。每个模板的ＣＴ值与该模板的起始拷

贝数的对数存在线性关系绝对达令主题曲，利用已知起始拷贝数的标准品可作标准曲线，其中横

坐标代表起始拷贝数的对数铁甲钢拳主题曲，纵坐标代表Ｃｔ值黄龄的歌。因此，只要获得未知样品的Ｃｔ

值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数ｆ３５１。通过样品中目的基因与

内对照基因起始拷贝数的对比，我们可以得到目的基因的基因剂量tuxedo。检测基因外

显子重排突变的方法还包括Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）【３６１、荧光半定

量ＰＣＲ方法（ｓｅｍｉｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ

ＰＣＲ）［３７１和多重连接依赖探针扩增法（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ

２

硕士学位论文第一章前言

ｌｉｇａｆｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ

ｐｒｏｂｅ

ｒｅａｌ．ｔｉｍｅ

ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ双球下期必出号，ＭＬＰＡ）［３８１【３９】等老人与海小说下载。在本研究中钢琴一对一陪练，我们选择

ＰＣＲ而不是半定量ＰＣＲ等传统定量方法检测ｎ归家心切，－』基因外显子重排改变

的原因如下：（１）定量精确：ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

ＰＣＲ的反应进程能被实时检测，而其它方

法大多是在终点检测；（２）损耗降低：只需用少量的ＤＮＡ模板；（３）操作安全：

不需要使用放射性同位素；（４）实验快捷：整个ＰＣＲ反应在２小时之内完成［４０ｌ黄雨桐。

本研究中夜空中最亮的星原唱，拟采用ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ技术对２１个ＡＲＥＰ和６个ＤＲＤ家系先证者进行

ＤＪ－１基因外显子重排突变的检测118开奖直播现场香港 开奖结果，采用ＤＮＡ直接测序技术对尚未测序的５个

ＡＲＥＰ和３个ＤＲＤ家系先证者进行Ｄ‘Ｌ湘江颂，基因点突变、小片段插入或／和缺失突变的

检测。

３

硕士学位论文第一章前言

表１－１目前已发现口厂－缓因突变简表

家系起源突变形式

ｅｘｏｎｌ一５ｄｅｌ

Ｌ１６６Ｐ

基因重排检测

参考文献

Ｂｏｎｉｆａｔｉ

荷兰

意大利

纯合１４Ｋｂ缺失

纯合点突变

是

Ｖ【９】

Ｇ５７Ａ

ｃ．５６ｄｅｌＣ

西班牙

西班牙

复合杂合突变

复合杂合突变

否Ｈａｇｕｅ

Ｓ［２０】

ＩＶＳ６一ｌＧ—Ｃ

Ｍ２６Ｉ

Ｄ１４９Ａ

北欧犹太纯合点突变

杂合点突变

否

Ａｂｏｕ－Ｓｌｅｉｍａｎ

ＰＭ【２１】

土耳其纯合突变

否ＨｃｒｉｎｇＲ【２２】

Ａ１０４Ｔ

拉丁美洲杂合点突变

否

Ｃｌａｒｋ

ＬＮ【２３】

Ｅｘ５—７ｄｅｌ

北意大利杂合缺失

杂合突变

是Ｈｅｄｒｉｃｈ

Ｋ【２４】

ＩＶＳ５＋２—１２ｄｅｌ俄罗斯

Ｅ１６３Ｋ

ｇ．１６８—１８５ｄｕｐ

意大利

纯合突变

纯合突变

否

Ａｎｎｅｓｉ

Ｇ【２５】

４

硕士学位论文

第二章材料和方法

第二章材料与方法

２．１主要试剂和仪器

２．１．１主要试剂及耗材

１０ＩｎＭ心ｎ甲

ＳＤＳ（Ｓｏｄｉｔｍ

ｄｏｄｅｃｙｌ

ｓｕｌｆａｔｅ）

聚丙烯酰胺

ＮＮ．聚丙烯酰胺

ＴａｑＤＮＡ聚合酶

荧光定量ＰＣＲ反应液

１００ｂｐ

ＤＮＡＬａｄｄｅｒ

冰醋酸

甲醛溶液

甘油

无水乙醇

ＴＥＭＥＤ

聊．Ａ

硝酸银

氢氧化钠

Ｐｍｔｅｉｎａｓｅ

Ｋ

Ｍｓｐ

Ｉ

１５

ｍｌ一次性离，０管

５０ｍｌ一次性离心管

０．２ｍｌＰＣＲ管

０．２ｍｌ荧光定量ＰＣＲ管

一次性ＰＥ手套

２．１．２试剂配制

美国Ｓａｎｇｏｎ公司

Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司

Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司

Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司

河南洛阳华美生物工程公司

ＴａＫａＲａ公司

河南洛阳华美生物工程公司

湖南化学试剂总厂

湖南师范大化学试剂厂

湖南师范大化学试剂厂

湖南师范大化学试莉厂

上海生工生化工程有限公司

Ｓｉｇｍａ公司

中国上海试剂—厂

中国Ｅ海试剂总厂

苏洲桃源新亭化工厂

Ｓｉｇｍａ公司

Ｔａ№公司

Ｆａｌｃｏｎ公司

Ｆａｌｃｏｎ公司

Ｒｏｂｂｉｎｓ公司

ＡＢＩ公司

上海都德利塑料制品厂

型堂堡笙苎

１）电泳缓冲液（Ｏ．５ｘＴＢＥ或ＩｘＴＢＥ）

１０ｘＴＢＥ（储存液）：

Ｏ．９ｍｍｏｌ／Ｌ＇ｌｒｉｓ碱

０．９ｍｍｏｌ／Ｌ硼酸

０．０２ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ（ＰＨ８．Ｏ）

苎三兰塑垫塑查堡

２）载样缓冲液

６×中性载样缓冲液

２×变性载样缓冲液

３）银染缓冲液

４）１×洗脱缓冲液体

５）１０％过硫酸铵

６）３０％丙烯酰胺

７）８％中性聚丙烯酰胺凝胶

Ｏ．２５％溴酚蓝

Ｏ．２５％－甲苯青

４０％（ｗ／ｖ）蔗糖水溶液

０．０８％溴酚蓝

Ｏ．０８％－＂甲苯青

１００％甲酰胺溶液

固定液１０％甲醇

５％冰醋酸

染液

０．２％ＡｇＮ０３

显液

Ｏ．７５％ＮａｏＨ

０．５４％甲醛

Ｏ．５ｍｏｌ／Ｌ乙酸铵

１０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸镁

ｌｍｍｏｌ／Ｌ

ＥＤＴＡ（ＰＨ８．Ｏ）

０．１％ＳＤＳ

过硫酸铵

１９

加去离子水至１０ｍｌ

丙烯酰胺

２９９

加去离子水至１００ｍｌ

３０％丙烯酰胺８ｍｌ

１０ｘＴＢＥ

１．５ｍｌ

１０％过硫酸铵

３００１ａｌ

ＴＥＭＥＤ

２０１ａｌ

６

Ｎ，Ｎ’．亚甲双丙烯酰胺

硕士学位论文第二章材料和方法

加去离子水至

３０ｍｌ

８）１０ｒａｇ／ｈａ溴化乙锭（ＥＢ）１００ｍｇ溶于１０ｍｌ水中余炳轩，溶解后避光保存

２．１．３实验仪器

９６００ＰＣＲ仪

Ｐｅｒｋｉｎ

Ｅｌｍｅｒ公司

ＡＢｌ３１００测序仪

Ｐｅｒｋｉｎ

Ｅｌｍｅｒ公司

垂直电泳槽Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司

Ｍｏｄｅｌ

Ｊ－６Ｍ离心机

Ｂｅｃｋｍａａ公司

５４１５Ｄ型台式可调高速离心机

Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司

低电压电源电泳仪

Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司

ＢＰ－ｇ型架盘药物天平

上海医用激光仪器厂

Ｏ．５．１０ｕｌ加样

Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司

１０－１００ｕｌ加样

Ｅｐｐｅｎｄｏｆｆ公司

１００－１０００ｕｌ加样

Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司

Ｇｓ．７００扫描仪Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司

Ｄｕ－６４０紫外分光光度计

Ｂｅｃｋｍａａ公司

ＴＦ．１２型通风柜

深圳美加麓实验规划设计研究院

脱摇床

上海新波无线电厂

ＡＢＩ

Ｐｒｉｓｍ

７９００型荧光定量ＰＣＲ仪

ＡＢＩ公司

旋涡混合器

上海医疗仪器厂

２．２研究对象及基因组ＤＮＡ的提取

２１个ＡＲＥＰ家系和６个ＤＲＤ家系为１９９６年．２００７年中南大学湘雅医院神

经内科及中国医学遗传学国家重点实验室的中国遗传病资源保藏中心所收集的

病例拉兹之歌，分别来自湖南、湖北、江西、云南、浙江、山东、广东和新疆等省市，

均为汉族愤怒的情人。ＡＲＥＰ的临床诊断符合Ｌｕｃｋｉｎｇ纠１２１提出的以下标准：经过多巴制

剂后蒙古族歌手，患者的帕金森样症状至少好转３０％；遗传方式呈常染体隐性遗传妒忌心，

即患者及其同胞患病，父母表型正常或只有一名患者而父母为近亲结婚；患者

的发病年龄≤４５岁；无阳性病理征，无眼肌麻痹，无早期痴呆或自主神经功能

７

硕士学位论文

第二章材料和方法

障碍。ＤＲＤ的临床诊断符合Ｎｙｇａａｒｄ等…提出的标准：对小剂量左旋多巴有显

著性和持久性反应的肌张力障碍helmet。在有血ＤＮＡ标本的患者中asa akira，男２１例g r l，女１８

例；发病年龄３～４２岁魏然 爱是怀疑，平均为２３．４士１０．１岁；病程２．３６年骨头镇 下载，平均１１．１士７．０年。

另取无血缘关系的正常１００名作为对照。所有患者、家系成员及正常人都

经知情同意假山模型，抽取外周静脉血５－１０ｍｌ笨小孩歌词，按常规酚／氯仿法抽提基因组ＤＮＡ，一２０＂（２

保存。取先证者ＤＮＡ稀释为３０ｎｇ／ｕ

ｌ待用程星龄与张艺兴。阳性对照ＤＪ－１第１－５号外显子杂

合缺失的ＤＮＡ由Ｄｒ．Ｂｏｎｉｆａｔｉ．Ｖ惠赠。ＤＮＡ直接测序实验中的研究对象为上述

病例中近期收集的５个ＡＲＥＰ家系和３个ＤＲＤ家系的先证者方晓日。

２．３实验方法

２．３．１ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

ＰｅＲ实验方法

２．３．１．１引物合成实验所用的ＤＪ－１基因的编码外显子（ｃｏｄｉｎｇｅｘｏｎｓ）的引物

由ＰＩｕＭＥＲＥＸＰＲＥＳＳ软件设计，内对照ａｌｂｕｍｉｎ（ＡＬＢ）基因引物参见文献１４２１，

引物由由上海Ｓａｎｇｏｎ公司合成。引物序列及扩增片段大小见表２－１。

表２－１口州基因６个编码外显子引物序列

８

硕士学位论文第二章材料和方法

２．３．１．２反应体系

试剂

ＳＹＢＲＰｒｅｍｉｘＥｘ

Ｔａｑ（２×）

５

０

Ｏ

Ｏ

ｌ

３

１

１０“Ｍ／山正向引物

１０１ｘＭ／Ｉｘｌ反向引物

ＲＯＸＲｅｆｅｒｅｎｃｅ

Ｄｙｅ

ｇＤＮＡ

ｄｄＨ２０

ｎ卸卸却Ⅱ４

ｍ

总体积

２．３．１．３反应液配制

将标准品ＤＮＡ（正常人ＤＮＡ）倍比稀释为４０ｒｉｇ／ｌａ

ｌ、２０ｎｇ；／ｕｌ、１０ｎｇ／ｐ

ｌ、

５Ｉｌｇ／｜Ｉｌ四种浓度各８１１ｌ待用如果没有你 伴奏。反应设立内对照彳肋基因，将４种浓度标准品

ＤＮＡ与待测样品同时进行扩增，ＤＪ－１基因各外显子分别与ＡＬＢ基因对比punker，均

做三次重复双恋txt下载。

２．３．１．４反应条件：

反应在ＡＢＩ

Ｐｒｉｓｍ

７９００荧光定量ＰＣＲ仪上进行，分三个阶段乔家大院主题曲，第一阶段

９５３２５ｒａｉｎ笔记作词，１个循环，第二阶段９５．１２５ｓ居山植，６０℃１５ｓyoubelongwithme，７２．【２３０ｓ，４０个循环一个人唱情歌吉他谱。第三阶

段９５℃１５ｓdumbledore，６０℃３０ｓ，９５℃１５ｓ丁太升道歉。

２．３．１．５质量控制

在同一次ＰＣＲ反应中，我们用／２／－１第１．５号外显子杂合缺失ＤＮＡ（阳性

对照）和１名正常人外周血ＤＮＡ（阴性对照）与患者外周血ＤＮＡ同时扩增作

为质量控制。

２．３．１．６结果分析

２．３．１．６．１

ｒｅａＩ－ｔｉｍ

ＰＣＲ扩增效率分析

在ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ中，总信号＝本底信号＋分子数量Ｘ单位信号强度，ｌｉｐ．－

Ｒｎ＝Ｒａ＋Ｘｏ（１＋Ｅ）ｎ

Ｒｓ

公式（２—１）

Ｒｎ表示第ｎ个循环时的总信号；ＲＢ表示本底；飚表示单位信号强度；Ｘｏ表示起始

ＤＮＡ数目；Ｅ表示ＰＣＲ效率

９

硕士学位论文

第二章材料和方法

当循环次数ｎ：Ｃmc词，值时：

ＲＴ＝ＲＢ＋Ｘｏ（Ｉ＋ＥＰ

Ｒｓ

Ｉｇ（ＲＴ—ＲＢ）＝ｌｇＸｏ＋ＣＴｌｇ（１＋Ｅ）＋ｌｇＲｓ

Ｃｒ

公式（２．２）

公式（２－３）

ｌｇ（１＋Ｅ）＝・ｌｇＸｏ＋ｌｇ（ＲＴ・Ｒａ）－ｌｇｇｓ

公式（２—４）

ｒ—

ｌｏｇ蜀

。ｌｏｇ饵，一心）一ｌｏｇＢ

公式（２－５）

公式（２．６）

公式（２．７）

全民k歌vk。ｌｏｇ（１＋如）ｌｏｇ（１＋Ｅｘ）

ｃＴ＝一ｋｌｇＸｏ＋ｂ

Ｅ＝１０－１ｒｇ＿１

因此我们可以根据标准曲线的斜率求出当次ＰＣＲ反应的扩增效率。当０．８

＜Ｅ＜１．２时儿歌大全100首连续播放，我们认为扩增效率较佳［４３１。

２．３．１．６．２ｒｅａＩ－ｔｉｍｅ

ＰＣＲ特异性分析

Ｇｒｅｅｎ

当温度逐渐上升颤音练习，ＤＮＡ变司基地，ＳＹＢＲＩ从ＤＮＡ小沟中释放出来4minute volume up，

荧光明显减弱北京演唱会，尤其是到达解链温度时，ＤＮＡ双链迅速解离不着北，荧光信号大幅度

下降曾轶可的歌曲。这种对应着ＤＮＡ双链解离的荧光信号下降构成的曲线被称为融解曲线谷村新司星中文版。

因为引物二聚体和其它非特异性ＰＣＲ产物通常与目标产物的解链温度不同赵本山2009春晚小品，所

以在融解曲线上能够被很容易的区分出来［４４１。在融解曲线上出现单一峰提示

ＰＣＲ扩增特异性良好。

２．３．１．６．３计算压，－开门见山 中国好声音，基因的相对拷贝数

根据标准曲线计算ＤＪ－１基因各外显子、４皿基因相对于标准品的起始拷贝

数，ＤＪ－１基因各外显子的相对拷贝数等于ＤＪ－１基因各外显子与ＡＬＢ基因相对

起始拷贝数之比。比值在０．８．１．２之间被认为正常；比值在０．４．０．７之间被认为

杂合缺失；比值在１．３．１．７之间被认为杂合重复㈣关于你的歌。

２．３．１．６．４统计学处理

应用ＳＰＳＳｌｌandy，５和Ｅｘｃｅｌ２００３统计软件进行相关数据处理及统计分析。

２．３．２

ＤＮＡ直接测序实验方法

２．３．２．１引物设计

ＤＪ－Ｉ基因各编码外显子引物序列参考文献［２４１，见表２．２冲上云霄2片尾曲，由上海博亚公司

合成刘若英 我不想念。

１０

硕士学位论文第二章材料和方法

表２－２口纠基因各外显予测序引物

丛星至曼！塑垒

２２－Ｆ

曼！塑壁型箜：：！：２

ＧＧＧＧＴＡＴＣＴＣＡＧＧＧＴＴＧＣＡＡＴＧ

ＴＧＧＣＴＡＡＡＡＡｒＣＧＡＴＧＴＯＧＧＡＣＴ

芏望笪嬖盔尘

１９９ｂｐ

狐

３

＂

ＧＧＴＧＡＧＡＣＣＣＣＡＴＣＴＣＴＣＴ丌

ＡＡＣＡＡＡＧＡＡＧＣＣＡⅨｒＧＡＡＧＧＡＡ

ＧＣ．Ｉ＝ＡＴＣＴＣＣＴＧｌ＝ＡＣｌｌＣＣＣＡＣＡ

ＴｒＧＡＧＧＴＡＴＡ—ⅡＴＧＡＧＴＡＧＡＡｒＩ］ｒＩＴ

２４７ｂｐ

娘

４

＂

２０１ｂｐ

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５

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口｜：于垠下。｝：善

ＡＧＧＴＣＡＧＡＧＡＧＣｒｒＧ瑚１Ｔｒ

ＡＣＣＡＡｒＧＡＣＧＣＴＧＣＡＡＣＡＣ

２２３ｂｐ

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２４０ｂｐ

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７

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ＧＣＣＣＫ几’ＡＧＧＡＴＧＴＣＡＣＣＴｒ

”

垠陌垠悼

７．Ｒ

２４５ｂｐ

ＴＴＣＣＴＡＡＣＧＯＣＣＴＧＴｒＩ℃ＴＣ

硕士学位论文第二章材料和方法

２．３．２．３反应条件：

外显子２反应条件：

９５℃１５ｍｉｎ

ｊ

／／＼ｃｙｃｌｅｓ

６０＂Ｃ

３０ｓ————————’７２１２３０ｓ

９５℃３０ｓ

Ｉ

７２℃

ｌＯｍｉｎ

ｉ

４℃ｆｏｒｅｖｅｒ

外显子３、４、５、７反应条件：

９５℃１５ｍｉｎ

Ｊ

６６＂Ｃ

３０ｓ———＋７２℃１ｍｉＩｌ３０ｓ

／＼础

Ｊ

９５℃３０ｓ

９５℃３０ｓ

卜一ｌ＂Ｃ／ｃｙｃｌｅ）

５６们０８—７２、４∞

外显子６反应条件：

９５＂Ｃ

１５ｍｉｎ

／＼ｚｓｃｙｃｌｃ

７２了㈨ｎ

４℃ｆｏｒｅｖｅｒ

Ｉ

６８＂Ｃ

／／＼ｃｙｃｌｅ

３０ｓ———叶７２℃４０ｓ

１２

９５＂Ｃ

３０ｓ

（一１＂Ｃ／ｃｙｃｌｅ）

硕士学位论文第二章材料和方法

／＼２ｓｃｙｃｌｅ

５６℃３０ｓ———◆７２℃３０ｓ

Ｉ

７２．ｊ～

４＂１２

２．３．２．４

ｆｏｒ

ｅｖｅｒ

ＰＯＲ反应产物聚丙烯酰胺凝胶电泳检测

取２．０ｐＩ

ＰＣＲ反应产物与１ｌ

６×中性载样缓冲液混合后，上样于６％中性聚

丙烯酰胺胶００％丙烯酰胺６ｍｌ，１０ｘＴＢＥ

１．５ｍｌ馨香祷祝，Ⅱ咖田１５ｍ水灵灵，１０％ＡＰＳ

３００ｍthan girl，

加—篓冰至妯ｎＤ刘旭峰，３００Ｖ电泳４０分钟亲亲茉莉花简谱，硝酸银染观察结果金淑。

２．３．２．５

ＤＮＡ序列分析

２．３．２．５．１外切酶酶切测序

对中性聚丙烯酰胺胶检测特异性好的ＰＣＲ产物用虾碱性磷酸酶

（ｐｈｏｓｐｈａｍｓｅ

ａｌｋａｌｉｎｅ他不爱我 莫文蔚，ｓｈｒｉｍｐ）和核酸外切酶（ｅｘｏｎｕｃｌｅｘＪｓｅ

Ｉ）消化（表２－４），

６０ｍｉｎ，８０＂（２

条件为：３ＴＣ１５ｍｉｎ，４＊Ｃ保存intothewild。酶切产物在ＡＢｌ３１００测序仪上直接

正反向测序甜蜜的伤口 山野，将测序结果与ＧｅｎＢａｎｋ中ＤＪ－１基因序列比较野良神op，使用ＤＮＡＳＴＡＲ

软件分析结果。

表２－４虾碱性磷酸酶和核酸外切酶处理的试剂组成

试剂（Ｒｅａｇｅｎｔｓ）

１０ｘＳＡＰ

Ｂｕｆｆｅｒ

体积（Ｖｏｌｕｍｅ）

０．２ｕｌ

０．８

ＳＡＰ（１Ｕ／曲

Ｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅ

ｄｄＨ２０

ｍ

Ｉ（２０Ｕ／ｒＬｌ）

０．４

ｕｌ

０．６ｍ

８．０ｕｌ

ＰＣＲ产物

２．３．２．５．２回收测序法

在中性聚丙烯酰胺胶检测中发现有异常条带的按常规方法回收纯化ＰＣＲ产

物，经ＡＢＩＰＲＩＳＭ３１００自动测序仪正反向测序，将测序结果与ＧｅｎＢａｎｋ中ＤＪ－１

基因序列比较the pursuit of happyness，使用ＤＮＡＳＴＡＲ软件分析结果妈妈怀里的歌。

硕士学位论文

第二章材料和方法

２．３．２．６限制性核酸内切酶分析

Ｍｓｐ

Ｉ酶切：ＤＪ－１基因外显子２（ＰＣＲ扩增大ｄｑ９９ｂｐ）上的Ｔ２９Ｃ碱基改变（Ｌ１０Ｐ）

产生了一个Ｍｓｐ

Ｉ酶切位点，被切成１１Ｉｂｐ和８８ｂｐ两个片段，野生型纯合子不能被

酶切，仍为１９９ｂｐ传颂之物op，杂合子有三个片段：１９９ｂｐ、１１ｌｂｐ和８８ｂｐ杯子歌。

２．３．２．６．１酶切反应体系

表２－５限制性内切酶反应体系

试剂

ＰＣＲ扩增产物

限制性内切酶（１０Ｕ／ｐ１）

１０ｘＴｂｕ仃ｂｒ

体积

３．０ｉｚｌ

１．０ｕｌ

２．０ｕｌ

ｄｄＨ２０

１４ｐｌ

２０ｕｌ

总体积

２．３．２．６．２酶切反应条件：３７。Ｃ酶切１小时。

２．３．２．６．３基因型检测：酶切产物经６％ＰＡＧＥ检测基因型。

１４

硕士学位论文

第三章结果

第三章结果

３．１

ｒｅａＩ＿ｔｉ咐ＰＣＲ实验结果

ｒｅａＩｔｉｍｅ

ＰＣＲ检测方法的建立

ＰＣＲ体系、条件

３．１．１

３．１．１．１

患者模板扩增的ＰＣＲ条件及体系如２．３．１．５中描述我就是我 张国荣，标准曲线及融解曲线

提示扩增效率及特异性均满意（图３．１、３－２、３－３、３－４、３．５、３－６、３－７）罗马的房子下载。

３．１．２

ＡＲＥＰ家系和ＤＲＤ患者检测结果

２１个ＡＲＥＰ家系和６个ＤＲＤ家系未发现存在ＤＪ－１基因各外显子的重复或缺失

突变dirty diana，ＤＪ－１基因各外显予起始拷贝数组工Ｂ基因起始拷贝数值波动于０．８０～１．２０之

间（表３．１）。阳性对照的ＤＪ－１基因第１．５号外显子起始拷贝数舭Ｂ基因起始拷贝

数值波动于０．４０～Ｏ．７０之间。

表３－１本组患者口厂－缓因各外显子相对拷贝数结果统计

竺±兰竺堡苎

苎三皇笙墨

图３－１外显子２的标准曲线及融解曲线

Ｉ：标准曲线ＩＩ：融解曲线

１６

硕十学位论文

第三章结果

图３－２外显子３的标准曲线及融解曲线

Ｉ：标准曲线ＩＩ：融解曲线

１７

硕十学位论文

第二章结果

图３－３外显子４的标准曲线及融解曲线

Ｉ：标准曲线１Ｉ：融解曲线

１８

硕十学位论文

第三章结果

图３－４外显子５的标准曲线及融解曲线

Ｉ：标准曲线Ⅱ：融解曲线

１９

硕十学位论文

第二章结果

图３－５外显子６的标准曲线及融解曲线

Ｉ：标准曲线Ⅱ：融解曲线

硕十学位论文

第二章结果

图３－６外显子７的标准曲线及融解曲线

Ｉ：标准曲线ＩＩ：融解曲线

２ｌ

硕＋学位论文

第二章结果

图３—７』ｚ肼々标准曲线及融解曲线

Ｉ：标准曲线Ⅱ：融解曲线

硕士学位论文第三章结果

３．２

ＤＮＡ直接测序实验结果

ＡＲＥＰ家系突变分析结果

３．２．Ｉ

ＤＮＡ序列分析在Ｆ２５先证者中发现了ＺＶ－＿Ｊ基因１个纯合突变：位于Ｚ沪－』基

因第２号外显子２９位碱基Ｔ被Ｃ替换（Ｔ２９ｃ），导致第ｌＯ位氨基酸由亮氨酸变

为脯氨酸（ＭＯＰ）绯闻女孩第三季插曲，该家系内两名患者均为功吖纯合突变，只携带ｚ旷』基因杂

合突变者表型正常（图３－８、３－９、３－１０），在１００名正常人中未发现这个碱基改

变德德玛演唱会，说明这是个致病突变波动少女。在其余４个ＡＲＦ＿Ｐ家系和３个ＤＲＤ家系中未发现彤一

基因突变微风吹乱的爱情。

－

一

图３－－８Ｆ２５９系．的家系图

口男挂一男性患者０女性●女性患者ｏ—口近亲鲒婚，先证者

硕士学位论文

第三章结果

图３－９

Ｆ２５家系口空中恋人，＿Ｊ基因第２外显子测序结果

Ｉ—ｌＩＩ：测序图Ｉ：患者ＩＶ２．

ＩＶ３（Ｔ２９Ｃ纯合突变ｋⅡ：携带者１１１、ｌｌ

２，ｍ１、ｍ２和ｉｖｌ

（Ｔ２９Ｃ杂合突变ｋⅢ：正常对照

图３—１０

Ｆ２５家系堪周第２外显子酶切结果

Ｍａｒｋｅｒ；Ｃ：Ｃｏｎｔｒｏｌ这片海，对照

讹１００ｂｐ

此外桃花庵，还发现ｎ卢Ｊ基因３个多态（表３－２）：这３个ＳＮＰ均位于内含子区，分别

为ＩＶＳ４＋３０ｈ・ｇ、ＩＶＳ４＋４５９－－candidates，ａ和ＩＶＳ４＋４６９－－，ａ（图３一１１）。经与多态数据库比较，

这些多态均已报道。

表３－２

ＡＲＥＰ先证者旭日阳刚 回家，基因突变分析所发现的多态结果

注：斜体为多态位点

硕士学位论文第三章结果

图３．１１刀扣，基因多态测序围（箭头示碱基改变部位）

ＩＶＳ４＋３０ｔ—ｇalesso，ＩＶＳ４＋４５９—ａ和ｌＶＳ４＋４６９—ａ

３．２．２

ＰＡＰ齐鲁风采双球，Ｋ７家系的临床特征（表３—３）

Ⅳ２（先证者）青岛往事下载，男，２５岁mister，２０岁发病分开，逐渐出现左上肢、右上肢不自主抖动，

动作缓慢，走路前冲，言语不清我反对，伴多汗，上述症状无明显的“晨轻暮重”婆婆来了片尾曲。神

经系统体查：面具脸不怕贼惦记下载，双上肢、下颁静止往震颤betty，四肢肌张力呈齿轮样增高，站

立时身体前倾，慌张步态任贤齐 小雪，腱反射正常common sense，ＵＰＤＰ涔运动评分６２分。服用美多巴后

症状明显减轻，４年后出现右上肢不自主运动。

Ⅳ３（先证者弟弟）男豹李小燕，２３岁梦江南，１８岁发病，逐渐出现言语不流畅，左上肢抖

动，不灵活大海的歌词。神经系统体查：左上肢静止性震颤，左上肢肌张力增高，行走时左

上肢连带运动消失，腱反射正常，ＵＰＤＲＳ运动评分１１分。未服用美多巴三傻大闹宝莱坞 歌曲。

硕士学位论文

第三章结果

表３－３

ＰＡＲＫ７家系的主要临床特征

硕士学位论文第四章讨论

第四章讨论

在ＰＤ的遗传学研究中，人们发现部分基因的拷贝数变异（ｃｏｐｙ－ｎｕｍｂｅｒ

ｖａｒｉａｔｉｏｎ，ｃＮＶ）与ＰＤ有关印度慢摇，如：ａ嘞搬甜ｃ跆加的二拷贝或三拷贝异常重复能导致

常染体显性遗传早发性ｐＤｌ４５】［４６１；ＰＩＮＫｌ基因外显子重排能导致家族性早发性

ｐＤ［４７１ｔ４Ｓｌmelon。目前全世界已经发现两种ＤＪ－Ｉ基因外显子的重排突变：ＢｏｎｉｆａｔｉＶ等１９１

在一个荷兰家系中发现ＤＪ－１基因第１．５号外显子的纯合缺失突变；Ｈｅｄｒｉｅｈ

Ｋ等［２４１

在一个意大利家系中发现ＤＪ－１基因第５．７号外显子的杂合缺失突变韩国的新年。正是由于

ＣＮＶ与部分遗传性疾病密切相关，分析剂量敏感的特定ＤＮＡ区域的重排对于疾

病的分子诊断尤为重要［４９１。ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

ＰＣＲ是目前检测基因重排的最佳方法之一有没有 by2，

序列特异性的探针Ｉｓｏ］或者非特异性的染料【５”都可以作为ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

ＰＣＲ的报告物

质。通过探针特异性的序列与目标序列的结合万家麟，探针具有很高的特异性。但是晓华，

探针与引物的配套设计相对较为困难；探针的价格较高［５２１。染料荧光价格相对便

宜兄贵引导人民，有利于我们灵活的摸索实验条件你是我的眼睛下载。染料荧光的缺陷在于不能识别特异性的

ＤＮＡ序列伴奏 下载，但是仔细的引物设计、模板的纯化可以避免或尽量减少非特异性的

荧光的产生温州一家人主题曲，ＰＣＲ反应后的融解曲线分析能够判别非特异性的荧光【５３１小爱人。在ＰＤ相关

基因的重排突变检测中李孝利潘玮柏，２００１年Ｈｅｄｒｉｃｈ等瞰】选用相邻探针（Ｌｉｇｈｔ

Ｃｙｃｌｅ

ｐｒｏｂｅ）

进行ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

ＰＣＲ检测ｐａｒｋｉｎ基因各外显子的重排突变真的爱你前奏吉他谱。此后，该技术被应用于

ＤＪ－１基因各外显子重排突变的检测１２４１。在我们的研究中，我们选用ＳＹＢＲ

Ｇｒｅｅｎ

Ｉ

进行ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ检测２１个ＡＲＥＰ家系和６个ＤＲＤ家系ＤＪ－Ｉ基因外显子的重排突

变cf主题曲。经过反复的实验摸索，我们获得了扩增效率和特异性均满意的ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

ＰＣＲ

反应条件及各外显子引物梦想家园。经过检测离家500里，在本组ＡＲＥＰ家系未发现ＤＪ－１的重排突变舞研艺考。

以上结果提示中国ＡＲＥＰ患者的ＤＪ－１基因外显子重排突变罕见2020年香港免费资料大全，但也不排除阴性

结果与我们的样本量较小有关仙三下载。另外theking2hearts下载，我们检测阳性对照的相对拷贝数在０．４．０．７

之间，在公认的杂合缺失突变的范围内，以上结果进一步证实了我们建立的应用

ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

ＰＣＲ检测Ｄ‘，＿Ｊ基因外显子重排突变的技术平台的可靠性。

迄今为止的研究表明娃娃脸 mp，ＤＪ－Ｉ基因的突变频率较低，仅约为１％。在全世界范

围内，共发现Ｄ‘international love，－』基因突变１２个edd动漫，包括错义突变、截短突变、剪切位点突变和大

片断缺失等（见表１．１）曲尼次仁　　。目前有２个涉及华人的研究，Ｌｏｅｋｈａｒｔ等【５５１对台湾地区４１

硕士学位论文

第四章讨论

个排除ｐａｒｋｉｎ基因突变的早发性帕金森病（ｅａｒｌｙ－ｏｎｓｅｔ

ｐａｒｌｄｎｓｏｎｉｓｍ红梅花儿开电视剧，ＥＯＰ）患者进

行了ＤＪ－１基因突变检测我绝对不能失去你，未发现致病突变；Ｔａｎ等【蚓对包括５７个新加坡华人的ＥＯＰ

患者进行了ＤＪ－１基因突变检测杨丞琳行李被遗落，结果也未发现致病突变。我们在２１个ＡＲＥＰ家系

中发现１个家系有ＤＪ－Ｉ基因的１个纯合突变（ＬＩＯＰ），１个家系有ＤＪ－１基因的１个杂

合突变（Ａ３９Ｓ）吉克克的，ＤＪ－Ｉ基因在本组ＡＲＥＰ患者中的突变频率约为９．５％。在本研究

小组其他成员进行的本组ＡＲＥＰ患者的突变分析中交给国家，共发现砌基因突变１２个胡彦斌月光下载，

突变频率约为５７．１％无尽的华尔兹，共发现删突变３个，突变频率约为１４．３％。在本组ＡＲＥＰ

患者中erocool，ＤＪ－１基因突变频率较ｐａｒｋｉｎ基因突变、ＰＩＮＫｌ基因突变低，但是较欧洲

ＡＲＥＰ的研究结果高爱不爱我 大嘴巴。以上结果提示ａ‘ｊ基因突变在华人ＡＲＥＰ患者人中可能具

有重要的作用。本研究小组对６例ＤＲＤ患者运用ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ技术结合ＤＮＡ直接

测序技术进行－ｆｐａｒｋｉｎ、Ｐ１ＮＫｌ和ＤＪ－１的突变分析，未发现致病突变；但是，本

研究小组另一位成员对该６例ＤＲＤ患者运用ＤＮＡ直接测序技术进行了ＧＣＨｌ的突

变分析houhuiwuqi，发现一位患者存在１个ＧＣＨｌ基因的一个ＭＩＩ突交，上述结果提示虽然

ＡＲＥＰ与ＤＲＤ的临床表型相似，但是遗传背景不同。

分析２名患者的临床表现，其主要特征；（１）发病年龄早徐泽羽，分别在１９岁和１８岁

发病；（２）起病时无肌张力障碍；（３）先证者帕金森病三联征（运动迟缓、肌强直、

静止性震颤）明显；（４）无症状波动阿姆 格莱美，睡眠后减轻；（５）无腱反射活跃；（６）对多巴

制剂反应良好；（７）可出现多巴制剂诱导的运动障碍珍妮 杰克逊。以上特点与国外报道的

ＰＡＲＫ７家系临床特征基本一致【５７】草原英雄。迄今为止我真的好累，由于已知的ＤＪ－１突变大部分为能

造成蛋白质截短的剪切位点突变或缺失突变死神少女插曲，人们普遍认为ｎ，＿Ｊ相关ＰＤ的发病

机制与功能丧失（１０ｓｓｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎ）有关【５懿春天华尔兹下载。而在错义突变中，只有Ｌ１６６Ｐ突变研

究得比较清楚潘玮柏全面通缉。Ｌ１６６Ｐ突变的ＤＪ．１因为自我相互作用的破坏以单体的形式存在易

于ｇＥ２０ｓ／２６ｓ蛋白酶体降解，从而导致功能的丧失【５９１江美琪。本研究中首次发现的Ｌ１０Ｐ

突交是否由于自身结构破坏致病还有待于进一步研究。

本研究发现了３个ＤＪ－１基因多态。目前，ＤＪ－１基因多态性是否为非孟德尔遗

传ＰＤ的危险因素仍不清楚练舞功 谢金燕。Ｍ鲫ｉｓ等嗍和Ｅｅｒｏｌａ等［６１１分别对英国及芬兰人进行

了１个相同的ｌｇｂｐ插入／缺失多态（ｇ．１６８

１８５ｄｅｌ）的分析，均未发现ＰＤ患者组与

对照组有显著差异。在另一项ＤＪ－１基因多态性与ＰＤ的相关性的研究中，Ｈｅｄｒｉｃｈ

等瞄ｌ对３００个ＥＯＰ患者和９９个种族匹配的健康对照进行ＴＲ９８Ｑ的分析，发现患者和

硕士学位论文第四章讨论

对照之间Ｒ９８Ｑ频率无显著差异。虽然目前已经完成的ＤＪ－Ｉ基因多态性与ＰＤ的相

关性的研究均为阴性结果，但是ＤＪ－Ｉ基因多态性与非盂德尔遗传ＰＤ的关系有待

于更大样本和包括更多ＤＪ－Ｉ基因内多态位点的研究迸一步明确泰版 浪漫满屋。

硕士学位论文

第五章结论

第五章结论

（１）首次在国内建立应用ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ技术检测ｎ正Ｊ基因外显子重排突变的技

术平台，为开展帕金森病的基因诊断奠定基础摇篮曲。

（２）未发现本组ｍ通Ｐ家系存在Ｄ‘卢Ｊ基因重排突变有一种爱叫做放手下载，提示中国ＡＲＥＰ患者的ＤＪ－１

基因外显子重排突变罕见牧羊曲原唱。

（３）应用ＤＮＡ直接测序技术发现了１个新的ＤＪ－Ｉ基因突变（ＭＯＰ）美味关系，ＤＪ－１基因

在本组ＡＲＥＰ中突变频率约为９．５％金莎好听的歌，提示ＤＪ－１基因突变在华人早发性帕金

森病人中可能具有重要的作用。

（４）发现了ＤＪ－１基因的３个ＳＮＰ，分别为ⅣＳ４＋３０ｔ—ｇ、ⅣＳ４“５９—ａ和

ＩＶＳ４＋４６９－－－＊ａ安和桥。

硕士学位论文

第六章参考文献

第六章参考文献

Ⅲ

Ｆｏｍｏ

ＬＳ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ

ｏｆ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ

ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ

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１９９６．５５：２５９—２７２

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ＭＪ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ

ｏｆ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ

ｄｉｓｅａｓｅ：ｐａｒａｄｉｇｍ

ｓｈｉｆＩｓ

ａｎｄ

ｆｕｔｕｒｅ

ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ．

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阱

Ｓｈｅｒｅｒ

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吲

Ｇｏｌｄｍａｎ

ＳＭ，Ｔａｎｎｅｒ

Ｃ．Ｅｔｉｏｌｏｇｙ

ｏｆ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ

ｄｉｓｅａｓｅ．Ｉｎ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ＳＤｉｓｅａｓｅ

ｂｙ

Ｊａｎｋｏｖｉｃ

Ｊ，Ｔｏｌｏｓａ

ａｎｄ

Ｍｏｖｅｍｅｎｔ

Ｄｉｓｏｒｄｅｒ．Ｅｄｉｔｅｄ

Ｗｉｌｋｉｎｓ；１９９８：１３３３－１３５８

Ｅ．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ

ａｎｄ

嘲

ＰｏｌｙｒｎｅｍｐｏｕｌｏｅＭＨ，Ｌａｖｅｄａｎ

Ｃ，Ｌｅｒｏｙ

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ａ１．Ｍｕｔａｔｉｏｎ

ｉｎｔｈｅ

ａ－ｓｙｍｃｌｅｉｎ

ｇｅｎｅ

ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ

ｉｎ

ｆａｍｉｌｉｅｓ

ｗｉｔｈ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’．ｄｉｓｅａｓｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，２７６：２０４５－２０４７

ａ１．Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

ｉｎ

ｔｈｅ

Ｐａｒｋｉｎ

嘲

Ｋｉｔａｄａ

Ｔ，Ａｓａｋａｗａ

Ｓ叶子的离去，ＨａｔｔｏｒｉＮ，ｅｔ

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ａｕｔｏｓｏｍａｌ

ｒｅｃｅｓｓｉｖｅｊｕｖｅｎｉｌｅ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ．Ｎａｔｕｒｅ国际乐器展览会，１９９８，３９２：６０５－８

Ｇ

ｅｔ

ａ１．Ｔｈｅ

ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｐａｔｈｗａｙ

ｉｎ

Ｐａｒｋｉｎｅｏｎ＇ｓ

ｄｉｓｅａｓｅ．

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Ｌｅｒｏｙ

Ｅ滑头鬼之孙插曲，Ｂａｙｅｒ＆Ａｕｂｕｒｇｅｒ

Ｎａｔｕｒｅ爱与希望，１９９８，３９５：４５１－４５２．

嘲

Ｖａｌｅｎｔｃ

ＥＭmaika，Ａｂｏｕ－ＳｌｅｉｍａｎＰＭ，ＣａｐｕｔｏＶro227，髓ａ１．Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ

ｅａｒｌｙ’－ｏｎｓｅｔ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ

ｄｉｓｅａｓｅ

ｃａｕｓｅｄ

ｂｙ

ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

ｉｎ

ＰＩＮＫｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００４虚虚实实歌词，３０４：１１５８－－６０

嗍

Ｂｏｎｉｆａｔｉ

Ｖ

Ｒｉｚｚｕ

Ｐ身在福中，Ｖａｎ

Ｂａｒｅｎ

ＭＪ，ｅｔ

ａ１．（２００３）Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

ｏｎｓｅｔ

ｉｎ

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ｇｅｎｅ

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ｗｉｔｈａｕｔｏｓｏｍａｌ

２９９：２５昏－２５９．

ｒｅｃｅｓｓｉｖｅ

ｅａｒｌｙ

ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３一个人惺惺相惜，

呈．

ｍ

Ｐａｉｓｅａ－Ｒｕｉｎ

Ｃ，ｌａｉｎＳ孙楠的拯救，Ｅｖａｎｓ

ＥＷ，ｅｔ

ａ１．Ｃｌｏｎｉｎｇ

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ｇｏｎｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ

ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

ｔｈｉｎ

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Ｐｆ～ＲＫ８・ｌｉｎｋｅｄ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ＇ａ

ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｕｒｏｎ，２００４．４４：５９５６００

Ｊ苏格兰乐器，ｅｔａ１．Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ

ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ谢ｔＩｌ

Ｒａｍｉｒｅｚ

Ａgoofy，Ｈｅｉｍｂａｃｈ

Ａ，Ｇｎｍｄｅｍａｎｎ

ｄｅｍｅｎｔｉａ

ｉｓ

ｃａｕｓｅｄ

ｂｙ

ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

ｉｎ

ＡＴＰｌ３Ａ２，ｅｎｃｏｄｉｎｇ

ａ

ｌｙｓｏｓｏｍａｌ

ｔｙｐｅ

５

Ｐ—ｔｙｐｅ

ＡＴＰａｓｅ．Ｎａｔ

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ｅｔ

ｍ

Ｌｕｃｋｉｎｇ

ＣＢ，ＤｕｒｒＡ尸体派对，Ｂｏｎｉｆａｔｉ

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Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓｄｉｓｅａｓｅ

ａ１．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎ

ｅａｒｌｙ－ｏｎｓｅｔ

ａｎｄ

ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

ｉｎｔｈｅ

ｐａｒｋｉｎ

３ｌ

ｇｅｎｅ．Ｎ

Ｅｎｇｌ

Ｊ

Ｍｅｄ，２０００，

硕士学位论文

第六章参考文献

３４２：１５６０－１５６７

【１３】

Ｎｙｇａａｒｄ

ＴＧ

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ｄｙｓｔｏｎｉａ．Ｄｅｌｉｎｅａｔｉｏｎ

ｏｆｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌ

ｓｙｎｄｒｏｍｅ

ａｎｄｃｌｕｅｓ

ｔｏ

ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ａｄｖ

Ｎｅｎｒｏｌ80调，１９９３，６０：５７７—５８５

【１４】

Ｓｅｇａｗａ

Ｂｒａｉｎ

Ｍ．Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ

Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｄｙｓｔｏｎｉａ

ｗｉｔｌｌｍａｒｋｅｄｄｉｕｒｎａｌｆｌｕｃｔｕａｔｉｏｎ．

ｌ

Ｄｅｖpump it up 2012，２０００你好 陌生人，２２（Ｓｕｐｐ１）：￥６５２Ｓ８０

Ｅ金应生，ｅｔ

【１５】

Ｉｃｈｉｎｏｓｅ

Ｈ崔京浩，Ｏｈｙｅ

Ｔ夕阳红简谱，Ｔａｋａｈａｓｈｉ

ｕｃｔｕａｔｉｏｎｓ

ａ１．Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ

ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ

ｄｙｓｔｏｎｉａ砸ｔｈ

ｍａｒｋｅｄ

ｄｉｕｒｎａｌｆｌｃａｕｓｅｄ

ｂｙ

ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

ｉｎ

ｔｈｅ

ＧＴＰ

ｃｙｃｌｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ

Ｉ

ｇｅｎｅ．Ｎａｔ

Ｇｅｎｅｔ林嘉欣 恋之风景，１９９４，８：２３６－４２．

【１６】

Ｌｕｄｃｃｋｅ

Ｂ彭也，Ｋｎａｐｐｓｋｏｇ

ＰＭ广播配音，Ｃｌａｙｔｏｎ

ｎ

ｅｔ

ａ１．Ｒｅｃｅｓｓｉｖｅｌｙ

ｉｎｈｅｒｉｔｅｄＬ－ＤＯＰＡ

ａ

－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ

ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ

ｉｎｆａｎｃｙ

ｃａｕｓｅｄ

ｂｙ

ｐｏｉｎｔ

ｍｕｔａｔｉｏｎ皿２０５Ｐ）ｉｎ

ｔｈｅ

ｔｙｒｏｓｉｎｅｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｃｇｅｎｅ．ＨｕｍＭｏｌＧｅｎｅｔ哎呦不错哦 下载，１９９６绿袖子吉他，５：１０２３－１０２８．

【１７】

Ｆｕｍｋａｗａ

Ｙ飚ｓｈ

ＳＪ．Ｄｏｐａ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ

ｄｙｓｔｏｎｉａ：Ｒｅｃｅｎｔ

ｒｅｍａｉｎｉｎｇ

ｉｓｓｕｅｓ

ｔｏ

ｂｅ

ａｄｖａｎｃｅｓ

ａｎｄ

ａｄｄｒｅｓｓｅｄ．Ｍｏｖ

Ｄｉｓｏｒｄ咖啡恋曲，１９９９ngt48，１４：７０９—１５．

【１８】

Ｓｅｇａｗａ

Ｍ，ＮｏｍｕｒａＹ

Ｎｉｓｈｉｙａｍａ

Ｎ．Ａｕｔｏｓｏｍａｌｄｏｍｉｎａｎｔ

ｇｕａｎｏｓｉｎｅ

２００３；

ｔｄｐｈｏｓｐｈａｔｅｃｙｃｌｏｈｙｄｒｏｌａｓｃ

Ｉ

ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ（Ｓｅｇａｗａｄｉｓｅａｓｅ）．Ａｎｎ

Ｎｅｎｒｏｌ

５４（ｓｕｐｐｌ

６１：Ｓ３２－＿４５

【１９］

Ｎｙｇａａｒｄ

ＴＧ

Ｍａｒｓｄｅｎ

ＣＤ，Ｆａｈｎ

Ｓ．Ｄｏｐａ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ

ｄｙｓｔｏｎｉａ：ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ

ｔｒｅａｔｍｅｎｔ

ｒｅｓｐｏｎｓｅ

ａｎｄ

ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ爱戴图片，１９９１荷包金融，４１：１７４－－１８１

Ｄ白凯南贾玲小品全集，ｅｔ

ａ１．Ｅａｒｌｙ－ｏｎｓｅｔ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ

ＨａｇｕｅＳ兵哥哥广场舞分解动作，Ｒｏｇａｅｖａ

Ｅ美国好声音评委，Ｈｃｒｎａｎｄｅｚ

ｃａｕｓｅｄ

ｂｙ

ａ

ｃｏｍｐｏｕｎｄ

ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ

ＤＪ－１

ｍｕｔａｔｉｏｎ．Ａｎｎ

Ｎｅｕｒｏｌ，２００３默默无语，５４：２７１－２７４

【２１】

Ａｂｏｕ－Ｓｌｅｉｍａｎ

ＰＭ，Ｈｅａｌｙ

ＤＧＱｕｉｎｎ

Ｎ无线环绕音箱，ｅｔ

ａ１．Ｔｈｅ

ｒｏｌｅｏｆ

ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ

ＤＪ－１

ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

ｉｎ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ

ｄｉｓｃａｓｅ．Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ，２００３，５４：２８３－２８６

Ｈｅｘｉｎｇ

Ｒ

Ｓｔｒａｕｓｓ

ＫＭ，Ｔａｏ）【，ｅｔ

ａ１．Ｎｏｖｅｌ

ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ

ｐ．Ｅ６４Ｄ

ｍｕｔａｔｉｏｎ

ｉｎＤＪｌ

ｉｎ

ｅａｒｌｙ

ｏｎｓｅｔ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ

ｄｉｓｅａｓｅ

０＇ＡＲＫＴ）．Ｈｕｍ

Ｍｕｔａｔ．２００４阳光路上 歌词，２４：３２１—９

Ｈ森海塞尔无线话筒，ｃｔ

ａ１．Ａｎａｌｙｓｉｓ

［２３】

Ｃｌａｒｋ

ＬＮ，Ａｆｒｉｄｉ

Ｓ，Ｍｅｊｉａ－Ｓａｎｔａｎａ

ｏｆａｎ

ｅａｒｌｙ－ｏｎｓｅｔ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ

ｄｉｓｅａｓｅ

ｃｏｈｏｒｔｆｏｒＤＪ—ｌ

ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．Ｍｏｖ

Ｄｉｓｏｒｄ，２００４．１９：７９６－８００

【２４】

Ｈｅｄｒｉｃｈ

Ｋ

Ｄｊａｎｎａ垃～Ｓｃｈａｆｅｒ

ｆｒｅｑｕｅｎｔ

ｔｈａｎ

Ｎ，ｅｔ

ａ１．ＤＪ－１（ＰＡＲＫＴ）ｍｕｔａｔｉｏｎｓ眦ｌｅｓｓ

ｉｎ

ｅａｒｌｙ－ｏｎｓｅｔ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ．

Ｐａｒｋｉｎ（ＰＡＲｒ２）ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ白噪音，２００４，６２：３８９－３９４

Ａｎｎｅｓｉ

Ｇ

Ｓａｖｃｔｔｉｃｒｉ

Ｇ

Ｐｕｇｌｉｅｓｅ

Ｐ’ｅｔ

ａ１．ＤＪ－１

ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

３２

ａｎｄ

ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ－

硕士学位论文

第六章参考文献

ｄｅｍｅｎｔｉａ－ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｅ

ｌａｔｅｒａｌｓｃｌｅｒｏｓｉｓ

ｃｏｍｐｌｅｘ．Ａｎｎ

Ｎｅｕｒ０１．２００５，５８：８０３－７

【２６】Ｔａｎｇ

Ｂ，Ｘｉｏｎｇ

Ｈ倾城一笑，Ｓｕｎ

Ｂ

ｅｔ

ａ１．ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆＰＩＮＫｌ

ａｎｄ

ＤＪ－１

ｃｏｎｆｅｒｓ

ｄｉｇｅｎｉｃ

ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ

ｏｆｅａｒｌｙ・ｏｎｓｅｔ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ．Ｈｕｍ

Ｍｏｌ

Ｇｅｎｅｔ，２００６飞雪玉花笛子简谱，１５：１８１６－２５

【２７】郭纪锋路太弯伴奏，唐北沙，张玉虎会哭的人不一定流泪，等．常染体隐性遗传性早发型帕金森综合征ＤＪｌ

基因突变研究，中华医学遗传学杂志，２００５，２２（０６）：６４１．６４３

【２８】Ｅｎｇｅｌｅｎ

ＪＪ，Ｍｏｏｇ

Ｕ我是歌手林志炫你的眼神，ＥｖｅｒｓＪＬ，ｅｔ

ａ１．Ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ

ｏｆ

ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ

ｒｅｇｉｏｎ

８ｐ２３．１／１０２３．３：ａｂｅｎｉｇｎ

ｖａｒｉａｎｔ？Ａｍ

Ｊ

Ｍｅｄ

Ｇｅｎｅｔ，２０００重庆小男孩，９１：１８－２１

［２９】Ｌｅｅ

ＪＡ李依林，Ｌｕｐｓｋｉ

ＪＲ．Ｇａｎｏｍｉｃ

ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓ

ａｎｄ

ｇｅｎｅ

ｃｏｐｙ－ｎｕｍｂｅｒ

ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｎｅｕｒｏｎ，２００６，５２（１）：１０３—２１

ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ

ａｓ

ａｃａｕｓｅ

ｏｆｎｅｒｖｏｕｓ

ｓｙｓｔｅｍ

【３０］Ｌｕｐｓｋｉ

ＪＲ彭佳慧成名曲，ｄｅ

Ｏｃａ－Ｌｕｎａ

ＲｌＶｌ，Ｓｌａｕｇｅｎｈａｕｐｔ

Ｓ，ｅｔ

ａ１．ＤＮＡ

ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ

ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ

ｗｉｔｈ

Ｃｈａｒｃｏｔ－Ｍａｒｉｅ—Ｔｏｏｔｈｄｉｓｅａｓｅｔｙｐｅ

１Ａ．Ｃｅｌｌ，１９９１weightless，６６：２１９－２３２

［３１】Ｃｈａｎｃｅ

ＰＦ，Ａｌｄｅｒｓｏｎ

ＭＫ，Ｌｅｐｐｉｇ

ＫＡ，ｃｔ

ａ１．ＤＮＡｄｅｌｅｔｉｏｎａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈ

ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ

ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ

ｗｉｔｈ

ｌｉａｂｉｌｉｔｙ

ｔｏ

ｐｒｅｓｓｕｒｅｐａｌｓｉｅｓ．Ｃｅｌｌ，１９９３遥远的时空中舞一夜，７２：１４３—１５１

Ｂ１

ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ

［３２】Ｐａｄｉａｔｈ

ＱＳ70somethingmag视频，Ｓａｉｇｏｈ

Ｋ

Ｓｃｈｉｆｆｍａｕｎ＆ｅｔ

ａ１．Ｌａｍｉｎ

ｃａｕｓｅ

ａｕｔｏｓｏｍａｌ

ｄｏｍｉｎａｎｔ

ｌｅｕｋｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ．ＮａｔＧｅｎｅｔ，２００６thruster，８：１

１１４－２３

【３３】Ｒｏｖｅｌｅｔ－Ｌｅｃｒｕｘ

Ａ，Ｈａｕｎｅｑｕｉｎ

Ｄ北京遇上西雅图铃声，ＲａｕｘＧ

ｅｔ

ａ１．ＡＰＰ

ｌｏｃｕｓ

ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ

ｃａｕｓｅｓ

ａｕｔｏｓｏｍａｌ

ｄｏｍｉｎａｎｔ

ｅａｒｌｙ－ｏａｓｅｔ

Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｄｉｓｅａｓｅ

ｗｉｔｈ

ｃｅｒｅｂｒａｌ

ａｍｙｌｏｉｄ

ａｎｇｉｏｐａｔｈｙ．Ｎａｔ

Ｇｅｎｅｔ，２００６，３８：２４－２６

ＰＳ窝心脚，ｅｔ

［３４】Ｈｉｇｕｃｈｉ＆ＤｏｌｌｉｎｇｅｒＧ彩铃平台，Ｗａｌｓｈ

ａ１．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ

ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ

ａｎｄ

ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ

ｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃ

ＤＮＡ－ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｂｉｏ・Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ王菲常石磊合唱 人间 ，１９９２，１０：４１３－４１７

［３５】Ｋｕｂｉｓｔａ

Ｍintothewild，Ａｎｄｒａｄｅ

ＪＭ，Ｂｅｎｇｔｓｓｏｎ

Ｍ王苑之，ｅｔ

ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｍｏｌ

Ａｓｐｅｃｔｓ

Ｍｅｄ百合电影快播，２００６，２７：９５－１２５

【３６］Ｒａｖｉｓｅ

Ｎ，Ｄｕｂｏｕｒｇ

ｂｙ

Ｏ，ＴａｒｄｉｅｕＳ青天衙门片尾曲，ｅｔ

ａ１．Ｔｈｅ

ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ

ｃｈａｉｎ

ａ１．Ｒａｐｉｄ

ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ

１７ｐ１１．２

ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓ

ＦＩＳＨ

ｗｉｔｈｏｕｔ

ｃｅｌｌ

ｃｕｌｔｕｒｅ（ｄｉｒｅｃｔＦＩＳＨ，ＤＦＩＳＨ）：ａ

ｗｉｔｈ

ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ

ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ

ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｅｓ．Ａｍ

Ｊｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｓｔｕｄｙ

ｏｆ１３０

ｐａｔｉｅｎｔｓ

Ｍｅｄ

Ｇｅｎｅｔ

Ａ别骗我，２００３，１

１８：４３—８

Ｎ，Ｋｉｔａｄａ

［３７】Ｈａｔｔｏｒｉ

Ｔ，Ｍａｔｓｕｍｉｎｅ

Ｈ少年儿童歌曲大全，ｅｔ

ａｉ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ

ｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓ

ｏｆ

ａ

ｎｏｖｅｌ

Ｐａｒｋｉｎ

ｇｅｎｅ

ｉｎ

Ｊａｐａｎｅｓｅ

ｆａｍｉｌｉｅｓ

ｗｉｔｈ

ａｕｔｏｓｏｍａｌ

ｒｅｃｅｓｓｉｖｅｊｕｖｅｎｉｌｅ

ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ：

ａｆｆｅｃｔｅｄ

ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｖａｒｉａｂｌｅ

ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ

ｄｅｌｅｔｉｏｎｓ

ｉｎ

ｔｈｅ

Ｐａｒｋｉｎ

ｇｅｎｅ

ｉｎ

ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ．Ａｎｎ

Ｎｅｕｒｏｌ终将逝去的青春，１９９８小刺猬歌词，４４（６）：９３５－９４１

【３８】ＳｃｈｏｕｔｅｎＪＰ八月桂花，ＭｃＥｌｇｕｒｍ

ＣＪ女人的天空 电视剧，Ｗａａｉｊｅｒ＆ｅｔ

３３

ａ１．Ｒｅｌａｔｉｖｅ

ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ

ｏｆ４０

硕士学位论文

第六章参考文献

ｎｕｃｌｅｉｃ

ａｃｉｄ

ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｂｙ

ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｌｉｇａｔｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｍ

ｐｒｏｂｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．

Ｎｕｃｌｅｉｃ

Ａｃｉｄｓ

Ｒｅｓ，２００２，３０：ｅ５７

【３９】Ｓｅｌｌｎｅｒ

ＬＮ花花公子 汪涵，Ｔａｙｌｏｒ

ＧＲ．ＭＬＰＡ

ａｎｄ

ＭＡＰＨ：ｎｅｗ

ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ

ｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ

ｇｅｎｅ

ｄｅｌｅｔｉｏｎｓ．Ｈｕｍ

Ｍｕｔａｔ英雄魂，２００４，２３：４１３—９

［４０】Ｐｏｎｃｈｅｌ

Ｆ，Ｔｏｏｍｅｓ

Ｃ柔柔 吕雯，Ｂｒａｎｓｆｉｅｌｄ

Ｋ

Ｉ

ｅｔ

ａ１．Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

ＰＣＲ

ｂａｓｅｄ

ｆｏｒ

ａ

ｏｎ

ＳＹＢＲ－Ｇｒｅｅｎ

ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ：ａｎ

ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ

ｔｏ

ｔｈｅ

ＴａｑＭａｎ

ａｓｓａｙ

ｒｅｌａｔｉｖｅ

ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ

ｏｆ

ｇａｎｅ

ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓ，ｇｅｎｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ

ａｎｄ

Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００３，１３，３：１８

ｍｉｃｒｏ

ｇａｎｅ

ｄｅｌｅｔｉｏｎｓ．ＢＭＣ

［４１】Ｎｙｇａａｒｄ

ＴＧ

Ｍａｒｓｄｅｌｌ

１９８８．５０：３７７－－３８４

ＣＤ天籁之战总决赛，Ｄｕｖｏｓｉｎ

ＲＣ．Ｄｏｐａ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ

ｄｙｓｔｏｕｌ＆Ａｄｖ

Ｎｅｕｒｏｌ专属味道，

［４２】ＡａｒｓｋｏｇＮＫ

Ｖｅｄｅｌｅｒ

ＣＡ．Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ

ｐｏｌｙｍｅｒａ∞ｃｈａｉｎ

ｒｅａｃｆｉｏｎ．Ａ

ｎｅｗｍｅｔｈｏｄ

ｔｈａｔｄｅｔｅｃｔｓ

ｂｏｔｈｔｈｅ

ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ

ｍｙｅｌｉｎ

ｐｒｏｔｅｉｎ

２２

ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ

ｉｎ

Ｃｈａｒｃｏｔ－Ｍａｒｉｅ－Ｔｏｏｔｈ

１Ａｄｉｓｅａｓｅａｎｄ

ｔｈｅ

ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ

ｍｙｅｌｉｎ

ｐｒｏｔｅｉｎ

２２ｄｅｌｅｔｉｏｎ

ｉｎ

ｌｉａｂｉｌｉｔｙ

ｔｏ

ｐｒｅｓｓｕｒｅ

ｐａｌｓｉｅｓ．Ｈｕｍ

Ｇｅｎｅｔ．２０００生活恰恰恰，

ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ

ｗｉｔｈ

１０７：４９４－４９８

［４３】Ｋｕｂｉｓｔａ

Ｍ五花马青锋剑歌曲，Ａｎｄｒａｄｅ

５Ｍ，Ｂｅｎｇｔｓｓｏｎ

Ｍ，ｅｔ

ｒｅｘｔｅｔｉｏｔＬ

ａ１．Ｔｈｅ

ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

ｐｏｌｙｍｅｍｓｅ

ｃｈａｉｎ

Ｍｏｌ

Ａｓｐｅｃｔｓ

Ｍｅａplease 金贤重，２００６into the wild，２７（２・３）：９５－１２５

ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ

［４４】Ｒｉｒｉｅ

ＫＭ，ＲａｓｍｕｓｓｅｎＲＰ，Ｗｉｔｔｗｅｒ天机算不尽，ＣＴ，ｅｔ

ａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔ

ｂｙ

ａｎａｌｙｓｉｓ

ｏｆ

ＤＮＡ

ｍｅｌｔｉｎｇ

ＣＩＵＮ部ｄｕｒｉｎｇ

ｔｈｅ

ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ

ｃｈａｉｎｒ＆ｄｃｔｉｏｌＬＡｎａｌ

Ｂｉｏｃｈｅｍ蔡昮佑，

１９９７，２４５：１５４－１６０

【４５】Ｎｉｓｈｉｏｋａ

Ｋ

ＨａｙａｓｈｉＳ十五夜望月王建，Ｆａｒｒｅｒ

ＭＪ魏三二人转，ｅｔ

ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ

ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ

ｏｆ

ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ

ｇｅｎｅ

ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ

ｉｎ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ．Ａｎｎ

Ｎｅｕｒｏｌ，２００６，５９：２９８－３０９

【４６】Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ

ＡＢ这是我们的纪念日，Ｆａｒｔｅｒ

Ｍ，Ｊｏｈｎｓｏｎ

Ｊ，ｅｔ

ａ１．ａ－Ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ

ｌｏｏｎｓ

ｔｒｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ

ｃａＵＳｅＳ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ

ｄｉｓｅａｓｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，３０２：８４１

【４７】ＡｔｓｕｍｉＭ，ＬｉＹ

Ｔｏｍｉｙａｍａ

Ｈ云海玉弓缘第二部，ｅｔ

ａ１．Ａ

６２－ｙｅａｘ－ｏｌｄ

ｗｏｍａｎ

ｗｉｔｈ

ｅａｒｌｙ－ｏｎｓｅｔ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ＇ｓ

ｄｉｓｅａｓｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅ

ＰＩＮＫｉ

ｇｅｎｅ

ｄｅｌｅｔｉｏｎ．Ｒｉｎｓｈｏ

Ｓｈｉｎｋｅｉｇａｋｕ古风网站，

２００６成均馆绯闻下载，４６（３）：１９９－２０２

［４８】ＭａｒｏｎｇｉｕＲ

Ｂｒａｎｃａｔｉ

Ｆ纪念我们死去的爱情，Ａｎｔｏｎｉｎｉ凡ｅｔ

ａ１．Ｗｈｏｌｅ

ｍｕｔａｔｉｏｎｓ

ｅｘｐａｎｄ

ｔｈｅＰＩＮＫｌ

ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ

ｇｅｎｅ

ｄｅｌｅｔｉｏｎａｎｄ

ｓｐｌｉｃｉｎｇ

ｓｐｅｃｔｒｕｍ．Ｈｕｍ

Ｍｕｔａｔ阅兵式背景音乐，２００７wangfei，２８（１）：９８

【４９】Ｒｕｉｚ－Ｐｏｎｔｅ

Ｃmc520，Ｌｏｉｍ

Ｌ＇Ｖｅ髀气ｃｔ

ａ１．Ｒａｐｉｄ

ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＰＣＲ

ｇｅｎｅ

硕士学位论文第六章参考文献

ｄｏｓａｇｅ

ｔｅｓｔ

ｆｏｒ

ｔｈｅ

ｄｉａｇｎｏｓｉｓ

ｏｆＤＮＡ

ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ

ａｎｄｄｅｌｅｔｉｏｎｓ．Ｃｌｉｎ

Ｃｈｅｍ，２０００，

４６（１０）：１５７４－８２

［５０】ＬｉＱ，ＬｕａｎＧ

ｂａｓｅｄ

ｏｎ

Ｇｕｏ

Ｑ夏芮丝，ｅｔ

ａ１．Ａｎｅｗｃｌａｓｓｏｆ

ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ

ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ

ｐｒｏｂｅｓ

ｓｐｅｃｉｆｉｃ

ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ

ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ．Ｎｕｃｌｅｉｃ

Ａｃｉｄｓ

Ｒｅｓ，２００２惠比寿マスカッツ，３０（２）：ｅ５

ｏｎ

［５１】Ｚｉｐｐｅｒ

Ｈ，ＢｒｍｍｅｒＨ香港打折信息，Ｂｅｍｈａｇｅｎ

Ｊ，ｅｔ

ａ１．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ

ＤＮＡｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｏｎ

ａｎｄ

ｓｕｒｆａｃｅ

ｂｉｎｄｉｎｇ

ｂｙ

ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ

Ｉdj7，ｉｔｓ

ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ

ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

ａｎｄ

ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌ

ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ

Ａｃｉｄｓ

Ｒｅｓ，２００４，３２（１２）：ｅ１０３．

ｅｔ

ａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｒｅａｌ

［５２】Ｍａｔｔａｒｕｃｃｈｉ

Ｅ，ＭａｒｓｏｎｉＭ在我梦里，Ｂｉｎｅｌｌｉ

Ｇ

ｔｉｍｅ

ＰＣＲ

ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ

ｆｏｒｔｈｅ

ｆｉｎｅ

ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ

ｏｆＳＮＰ’Ｓａｌｌｅｌｅｓ

ｉｎ

ＤＮＡ

ｐｏｏｌｓ：ａｓｓａｙｓｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，

ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ

ａｎｄ

ｐｒｅ－ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ．Ｊ

Ｂｉｏｃｈｅｍ

Ｍｏｌ

Ｂｉｏｌ，２００５，３８：５５５－５６２

１５３１

Ｂｅｎｇｔｓｓｏｎ

Ｍ，Ｓｔａｌｆｌｂｅｒｇ

Ａ，ＲｏｒｓｍａｎＰ刘若英专辑，ｅｔ

ａ１．Ｇｅｎｅ

ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ

ｉｎ

ｓｉｎｇｌｅ

ｃｅｌｌｓ

ｆｒｏｍｔｈｅ

ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ

ｉｓｌｅｔｓ

ｏｆ

Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ

ｒｅｖｅａｌｓ

ｌｏｇｎｏｒｍａｌ

ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ

ｏｆ

ｍＲＮＡ

ｌｅｖｅｌｓ．Ｇｅｎｏｍｅ

Ｒｅｓ仙人抚我顶，２００５，１５（１０）：１３８８－－１３９２．

【５４】ＨｅｄｒｉｃｈＫ

Ｋａｎｎ

Ｍ，Ｌａｎｔｈａｌｅｒ

ＡＪ，ｅｔ

ａ１．Ｔｈｅ

ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ

ｏｆｇｅｎｅ

ｄｏｓａｇｅ

ｓｔｕｄｉｅｓ：

ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ

ａｎａｌｙｓｉｓ

ｏｆｔｈｅ

ｐａｒｋｉｎｇｅｎｅ

ｉｎ

ｅａｒｌｙ—ｏｎｓｅｔ

ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ．Ｈｕｍ

Ｍｏｌ

Ｇｅｎｅｔ夫妻那些事主题曲，２００１，１０（１６）：１６４９—５６

【５５］Ｌｏｃｋｈａｒｔ

ＰＪ不要不要放开我下载，Ｂｏｕｎｄｓ

Ｒ

Ｈｕｌｉｈａｎ

Ｍ09，ｅｔ

ｏｆ

ａ１．Ｌａｃｋｏｆ

Ｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎ

ＤＪ－１

ｉｎ

ａ

Ｃｏｈｏｒｔ

Ｅａｒｌｙ－Ｏｎｓｅｔ

Ｔａｉｗａｎｅｓｅ

ＥｔｈｎｉｃＣｈｉｎｅｓｅ

ＷｉｔｈＰａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ．Ｍｏｖ

Ｄｉｓｏｒｄ资料，

２００４小蝌蚪在线视频免费观看，１９（９）｝：１０６５－１０６９

【５６］Ｔａｎ

ＥＫ你能听到我的心声吗，Ｔａｎ

Ｃ，ＺｈａｏＹ，ｃｔ

ａ１．Ｇｅｎｅｔｉｃ

ａｎａｌｙｓｉｓ

ｏｆＤＪ－１

ｉｎ

ａ

ｃｏｈｏｒｔ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ

ｄｉｓｅａｓｅ

ｐａｔｉｅｎｔｓ

ｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔ

ｅｔｈｎｉｃｉｔｙ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ

Ｌｅｔｔ每一次触碰，２００４．３６７：１０９－１１２

［５７】ＤｅｋｋｅｒＭ，ＢｏｎｉｆａｔｉＶ，Ｖａｎ

Ｓｗｉｅｔａｎ

Ｊ，ｅｔ

ＰＡＲＫ７－ｌｉｎｋｅｄ

ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌｆｅａｔｕｒｅｓａｎｄ

ｎｅｕｒｏｉｍａｇｉｎｇ

ｏｆ

ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ．ＭｏｖＤｉｓｏｒｄ樱花动漫下载免费版，２００３，１８（７）：７５１－７５７

ａ１．Ｃａｕｓｅｓｏｆ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ＇ｓ

ｄｉｓｅａｓｅ：

【５８】Ａｂｏｕ－Ｓｌｅｉｍａｎ

ＰＭ我们爱讲冷笑话，Ｈｅａｌｙ

ＤＧ

Ｗｏｏｄ

ＮＷ，ｅｔ

ｇｅｎｅｔｉｃｓ

ｏｆＤＪ一１．ＣｅｌｌＴｉｓｓｕｅ

Ｒｅｓhifi声卡推荐，２００４你好吗 歌词，３１８（１）：１８５・８

ＴＭ，ｅｔ

ａ１．Ａｍｉｓｓｇｎｓｅ

【５９】Ｍｏｏｒｅ

ＤＪ爱情公寓片头曲，Ｚｈａｎｇ

Ｌ，Ｄａｗｓｏｎ

ｔｏ

ｍｕｔａｔｉｏｎ皿１６６Ｐ）ｉｎ

ＤＪ－１，

ｌｉｎｋｅｄ

ｆａｍｉｌｉａｌ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ＇ｓ

ｄｉｓｅａｓｅ．ｃｏｎｆｅｒｓ

ｒｅｄｕｃｅｄ

ｐｒｏｔｅｉｎ

ｓｔａｂｉｌｉｔｙ

ａｎｄ

ｉｍｐａｉｒｓ

ｈｏｍｏ－ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｊ

Ｎｅｕｒｏｃｈｅｒｎ李素妍，２００３，８７：１５５８－－１５６７

［６０】Ｍｏｒｒｉｓ

ＣＭ利得汇，０’Ｂｒｉｅｎ

ｇｃｎｅ

ｉｓ

ｎｏｔ

ＫＫ我不知道发生了什么，Ｇｉｂｓｏｎ

ＡＭ，ｅｔ

ａ１．Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ

ｉｎｔｈｅ

ｈｕｍａｎ

ｏｒ

ＤＪ－１

ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ

ｗｉｔｈ

ｓｐｏｒａｄｉｃ

ｄｅｍｅｎｔｉａｗｉｔｈ

Ｌｅｗｙ

ｂｏｄｉｅｓ

Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’Ｓ

３５

硕士学位论文第六章参考文献

ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ

Ｌｅｔｔ，２００３，３５２：１５１—１５３

【６１】Ｅｅｒｏｌａ

Ｊ，Ｈｅｍａｎｄｅｚ

Ｄ后来，Ｌａｕｎｅｓ

Ｊ谁说你的爱我无所谓，ｅｔ

ａ１．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆ

ａ

ＤＪ・１口√锄￡７）

ＤＪ－１

ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｉｎＦｉｎｎｉｓｈＰＤ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ动力火车专辑，２００３我不配 歌词，６１：１０００－１００２

［６２］Ｈｅｄｒｉｃｈ

Ｋ不曾放弃，ＳｃｈａｆｅｒＮ亲亲我的宝贝mp，ＨｅｒｉｎｇＲ小虎队爱舞蹈，ｅｔ

ａ１．Ｔｈｅ

Ｒ９８Ｑ

ｖａｒｉａｔｉｏｎｉｎ

ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ．Ａｎｎ

Ｎｅｕｒｏｌ小kimi，２００４，５５：１４５

ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ

ａｒａｒｅ

硕士学位论文第七章综述

第七章综述

帕金森病相关基因致病机理研究进展

帕金森病（Ｐａｒｌｄｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）是一种常见的神经退行性疾病aquarius。其主要临

床特征是静止性震颤、肌强直、运动减少和姿势平衡障碍等；主要病理改变是中

脑黑质多巴胺能神经元进行性变性坏死豫剧mp，残存神经元ＣＬｅｗｙ体形成。帕金森病

的发病机制尚不清楚，可能涉及到遗传缺陷【”、氧化应激与线粒体缺陷、兴奋性

氨基酸毒性作用、环境毒素作用１２】等多种因素手机乐园软件下载。越来越多的证据表明文若，帕金森病

与遗传因素有关honest。流行病学调查研究显示，约１０％的帕金森病患者有家族史翻唐宫夜宴舞蹈完整版。

而近年来，大家系的连锁分析和越来越多的遗传性ＰＤ基因的克隆更是为ＰＤ的发

病机制研究提供了崭新的思路。到目前为止许篙，至少发现有１１个基因位点与ＰＤ连

锁（表１）。在这些ＰＤ相关的位点中十公分的距离，已经明确有６种基因的突变能引起家族性

ＰＤ（ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ，ｐａｒｋｉｎ，ＰＩＮＫＩ我最大的遗憾是你的遗憾与我有关，ＤＪ－Ｉ，ＬＲｇＫ２础ＴＰｌ３Ａ２）石卫。另外少女没有腰，ＵＣＨ－ＬＩ是可能

导致ＰＡＲＫ５的基因。因为，到目前为止黎明之前演员表，只在一个德国家系中发现一种ＵＣＨ－Ｌ１

表ｌ呈单基因遗传的家族性帕金森病致病基因简表

基因型

ＰＡＲＫＩ

ＰＡＲＫ２

ＰＡＲＫ３

致病基因

ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ

ｐａｒｋｉｎ

基因位点

４０，２１－２３

６ｑ２５．２－２７

２ｐ１３

蛋白功能

突触功能

Ｅ３连接酶

遗传方式

ＡＤ

ＡＲ

ＡＤ

ＡＤ

地理分布

希腊、意大利、德国

广泛分布

德国

美国

德国

ＰＡＲＫ４

ＰＡＲＫ５

ＰＡＲＫ６

ＰＡＲＫ７

ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ４ｑ２ｌ・２３

４ｒ１１４

］ｐ３５－３６

ｌｐ３６

１２ｐ１１．１＿１３．１

ｌｐ３６

ｌｐ３２

２ｑ３６—３７

ＵＣＨ－Ｌ１

ＰＩＮＫｌ

ＤＪ－１

泛素水解、连接酶

丝氨酸／苏氨酸激酶

参与氧化应激反应

尚不明确

ＡＤ

ＡＲ

ＡＲ

ＡＤ

ＡＲ

ＡＲ／ＡＤ

ＡＤ

意大利

广泛分布

广泛分布

ＰＡＲＫ８

ＰＡＲＫ９

ＰＡＲＫｌ０

ＬＲＲＫ２

ＡＴＰｌ３Ａ２

尚不明确

ＰＡＲＫｌ

１

硕士学位论文

第七章综述

的错义突变【４】南柯一梦。这里，我们就与单基因遗传的家族性帕金森病相关基因的致病

机理研究进展作一综述在线播放。

ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎａＰＡＲＫｌ）

ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ（ＰＡＲＫｌ）是第一个被发现的与常染体显性遗传帕金森病有关的

基因。ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ定位于４ｑ２１－２３老顽童，跨越约ｌｌＴｋｂ，含有６个外显子若无缘，编码１个由１４０

个氨基酸组成的ａ－ｓｙｎｕｅｌｅｉｎ蛋白deep woods。目前已经发现Ａ５３Ｔ贾斯汀 汀布莱克，Ａ３０Ｐ和Ｅ４６Ｋ这３种突变在

常染体显性遗传帕金森病家系内与疾病表型共分离【５】；另外天邪鬼，ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ位点

的二拷贝或三拷贝异常重复也能导致常染体显性遗传早发性ｐＤ｜６１［７１。

ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ是一种高度保守的蛋白质爱不爱我零点乐队，高度耐热，为小分子酸性蛋白质东北姑娘，含有１４０

个氨基酸梦随心动。ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ的序列可以分为三个结构域：高度保守的氨基端包含１１个

氨基酸不完全的６拷贝重复，中间部分是被称为非Ｂ．淀粉样蛋白（ＮＡＣ）的疏水

结构域编曲中国，羧基端没有固定的结构原件萨克斯大师。ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ：ＥＥ中枢神经系统内（特别是突

触前膜）丰富表达，定位于核周嘲。它是一种可溶的，天然伸展的蛋白质，含有

无规则卷曲。但它可能需要二级结构元件与一些配体及蛋白质相互作用改变其天

然构象，产生部分折叠结构。正常的ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ与其突变体（Ａ５３Ｔ、Ａ３０Ｐ）均

具有不规则卷曲豫剧阎立品，且在低浓度时当黑夜降临，不形成有意义的二级结构圣女湖。但是李勋，在较高浓度

时 拥抱 ，他们易于自我凝聚，产生淀粉样蛋白纤维。在体外，单体ａ．ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ经．过低

聚状态（原纤维）聚集成稳定的纤维。两种突变体的原纤维化率高于野生型的蛋

白，但Ａ５３Ｔ纤维化率更高男生贾里新传，这也提示了原纤维这一中间产物是具有神经毒性的［９１刁蛮小药凰。

大量证据提示ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ在突触前膜水平与膜相关作用有关。在牛脑中global icon，洳和

争ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ是磷脂酶Ｄ２的抑制物。ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ将囊泡与高浓度的磷脂酸联系起来，

并可能通过囊泡出芽与周转来调节膜的运输ｆ姗献爱心小品。ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ基因敲除小鼠的突触

功能出现障碍：在海马组织中，突触相关的蛋白的表达水平下降青石板街，突触前池的囊

泡数目减少【ｌｌ】广场舞火辣辣的情歌。另外，ａ－ｓｙｎｕｃ／ｅ／ｎ基因敲除的小鼠仅有轻微的临床表型都市桃花源，而不发

展为任何帕金森综合征的行为及组织病理学特征；仅对成对的电刺激有反应祖国颂合唱，表

现出增强的ＤＡ释放，提示ａ．ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ是一种活性依赖的6624，多巴胺能神经传递的

负性调节因子【１２１周劲松。分子伴侣能通过体内调节结合及释放来阻止不可逆蛋白聚集和

帮助非天然蛋白恰当的折叠你的眼睛背叛你的心。ａ－ｓｙｎｕｅｌｅｉｎ氨基端部分与分子伴侣１４－３—３有４０％同

源性，提示这两种蛋白质有着相同的功能【１３】wanqiu。除了脂质brr，ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ还能与许多

配体和胞内蛋白相互作用，并改变其活性，因此，被认为具有分子伴侣的功能菠萝小说。

硕士学位论文第七章综述

例如无国界爱情乐曲，ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ帮助突触蛋白ＳＮＡＲＥｓ（ｓｏｌｕｂｌｅＮＳＦａｔｔａｃｈｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ

ｒｅｃｅｐｔｏｒ）

的折叠和重折叠，而ＳＮＡＲＥｓ对于神经突触的神经递质的释放，囊泡循环，突触

的完整性有着重要的意义【１４】我等的人会是谁。目前，强有力的证据显示，ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ的聚集可能

是特发性或是遗传性ＰＤ发病机理的第一步，它导致－ｆＬｅｗｙ体内ａ．ｓｙｎｕｃｌｅｉｎｌ拘聚

集和纤维化。果蝇模型显示高水平的ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ能导致多巴胺神经元内异常蛋白

的聚集和神经毒性【１５１伍佳丽 冲动。研究者还发现果蝇体内表达的Ⅱ．ｓｙｎｕｅｌｅｉｎ

１２９位丝氨酸磷

酸化blinds，当１２９位丝氨酸突变成一个不能被磷酸化的残基，多巴胺神经元内聚集物

减少，细胞凋亡同时减少【１６１。ｃｔ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ能与凋亡前分子ＢＡＤ及ＰＫＣｄｅｌｔａ（ｄｅｌｔａ

ｉｓｏｆｏｒｍ

ｏｆｐｒｏｔｅｉｎ

ｋｉｎａｓｅ

Ｃ）相互作用，从而保护多巴胺能神经细胞对抗神经毒性

损伤乱弹阿翔。而Ｕ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎＡ５３Ｔ３９ＩＩ重了ＭＰＰ㈩（１－甲基４．苯基吡啶离子）诱导的ＤＮＡ

断裂【ｌ

７１。但是，过表达的ａ．ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ导致了转基因小鼠的多巴胺能神经元丧失及

早期的感觉运动功能的异常【１８】。免疫共沉淀证实骄傲的少年，野生型的泓ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ与野生型

或Ｌ１６６Ｐ突变的ＤＪ－Ｉ并不相互作用。但是过表达的野生型ＤＪ－１能增加热休克蛋白

７０的表达，从而抑制Ａ５３Ｔｔｔ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ弓［起的蛋白聚集和细胞毒性【１９１。组织学研

究显示无法停止，ＤＪ－ｌ抗体极少标记散发的ＰＤ和相关疾病ＤＬＢ患者脑组织中的Ｌｅｖｃｙ体。

虽然ａ．ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ与ＤＪ－１的免疫染并不完全重叠，但是它们存在共定位［２０１节奏感强的背景音乐。

ｐａｒｋｉｎ（ＰＡＲＫ２）

ｐａｒｋｉｎ（ＰＡＲＫ２）基因是引起常染体隐性遗传性帕金森病的最常见的致病基

因葫芦娃恶搞歌词。ｐａｒｋｉｎ基因定位于６ｐ２５．２－２７，全长１．３Ｍｂ月光漫步，包含１２个外显子陈美玲。迄今为止你一直在我心上，人

们已经发现超过１００种ｐａｒＭｎ基因突变，包括外显子的缺失、插入、以及点突变半职业选手。

ｐａｒｋｉｎ与早发性ＰＤ的关系相当密切。一个包括欧洲不同人个体的研究表明母亲的歌曲，

ｐａｒｋｉｎ基因突变导致Ｔ４９％的家族性早发性ＰＤ和１８％的散发性早发性ＰＤ。另外，

ｐａｒｋｉｎ突变出现在７７％的起病年龄小于２０岁的散发性ｐＤ＠ｔｚ”蛋七蛋舞。ｐａｒＭｎ基因的表

达产物—ｐａｒｋｉｎ是一种Ｅ３泛素蛋白连接酶挪亚方舟，在泛素一蛋白水解酶复合体通路中发挥

重要作用。ｐａｒｋｉｎ高度保守，分子量５２ｋＤ酸酸甜甜就是我歌谱，由４６５个氨基酸组成等待你的爱，其氨基端有７６个

氨基酸与泛素６２％同源，称为泛素样结构域；中间部分是连接区，其含有半胱氨酸

天冬氨酸酶切割位点；羧基端称为环指结构域，包括２１２个氨基酸咚巴拉周鹏，由两个环指结构

以及它们之间的环指间区组成也许明天歌词。目前的研究认为：ｐａｒｋｉｎ羧基端环指结构域

（ＩＢＲ－ＲＩＮＧｄｏｍａｉｎ）及２０Ｓ蛋白酶体羧基端亚基对于ｐａｒｋｉｎ与蛋白酶体的相互作

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第七章综述

用是必需的皿】羽泉的奔跑。

目前黑，已经鉴定出多种ｐａｒｋｉｎ的底物蛋白。其中，从ＡＲ－ＪＰ患者脑组织内

筛选出的一种氧位糖基化的小突触核蛋白ｃｔｓｐ２２是ｐａｒｋｉｎ的天然底物，在ＡＲ－ＪＰ

患者脑组织中以一种非泛素化的形式异常的聚集。体外试验也证实野生型的

ｐａｒｋｉｎ能将ｏｓｐ２２泛素化，但两种帕金森病相关的突变型的ｐａｒｋｉｎ没有这种作

用１２３】bigbang深圳演唱会。Ｓｙｎｐｈｉｌｉｎ－１是ａ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ的相互作用蛋白，Ｓｙｎｐｈｉｌｉｎ－１也是ｐａｒｋｉｎ的

底物蛋白陈俊杰。当ｐａｒｋｉｎ和ａ．ｓｙｎｕｅｌｅｉｎ、Ｓｙｎｐｈｉｌｉｎ－１共表达，细胞质内出现泛素阳

性包涵体，家族性的ｐａｒｋｉｎ突变破坏了Ｓｙｎｐｈｉｌｉｎ－１的泛素化及泛素阳性包涵体

的形成［２４１。以上结果都为ｐａｒｋｉｎ和ｃｔ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ之间提供了明确的联系景甜资料。最近的

研究发现就是讨厌我，ｐａｒｋｉｎ不能使Ｌ１６６Ｐ及Ｍ２６Ｉ突变的ＤＪ－１泛素化并降解我爱南开，相反与狗狗的10个约定，提

高了这些突变在培养细胞中的稳定性１２卯。在正常条件下，野生型和非致病性

Ｒ９８Ｑ及Ｋ１３０Ｒ的ＤＪ．１不与ｐａｒｋｉｎ相互作用；但是周传雄黄昏歌词，ＭＰＰ（＋）诱导的活性氧能

导致剂量依赖的ｐａｒｋｉｎ和野生型ＤＪ．１的相互作用。虽然氧化应激促使ｐａｒｋｉｎ

和野生型ＤＪ－１相互作用，但是这种作用并不导致ＤＪ．１的泛素化或降解【２５１。

Ｍｏｏｒｅ等【２５１还发现在ｐａｄ（ｉｎ相关ＰＤ患者脑组织中，额叶皮质ｐａｒｋｉｎ的缺乏导

致了ＤＪ－１的显著减少；而在散发性ＰＤ患者脑组织中2018年维也纳新年音乐会，ＤＪ．１明显增加决斗大师阵容。这提示

了ｐａｒｋｉｎ和ＤＪ－１参与了ＰＤ病因学的共同分子通路。

虽然已经分离出许多ｐａｒｋｉｎ的底物春天的赞歌，但没有一种底物是在黑质多巴胺能神

经元内选择性表达。经过测定ｐａｒｋｉｎ作用底物的表达水平发现白气球，在３号外显子

缺失的小鼠体内细胞分裂控制相关蛋白．Ｉ（ＣＤＣＲＥＬ－１）、ｓｙｎｐｈｉｌｉｎ和ｏｔ－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ

并未发生改变，多巴胺能神经元亦未减少［２６１１２７１。进一步的试验表明黑星期五钢琴曲，７号外显

子缺失的小鼠仅仅出现了氨酰ｔＲＮＡ连接酶辅助因子ｐ３８／ＪＴＶ－１水平的上调口研五月天网站。

目前，ｐａｒｋｉｎ功能研究的重心已经转向ｐａｒｋｉｎ对于线粒体的保护作用梵谷的左耳。已有研

究证实，在ｐａｒｋｉｎ基因敲除的小鼠脑内super star k4，数种参与线粒体功能或氧化应激的蛋

白水平在氧化应激时下调［２９１。而且在ｐａｒｋｉｎ无义突变的果蝇表现为生存期缩短、

运动功能缺陷、雄性不育以及容易受到氧自由基的损害１３０１。过表达的ｐａｒｋ．ｉｎ在

细胞模型中能阻止线粒体肿胀和应激诱导的凋亡［５１奉舞天。以上证据都提示ｐａｒｋｉｎ功

能的缺失对于线粒体功能失调及氧化应激损伤起着重要的作用酷漫屋。ｐａｒｋｉｎ能显著

的减弱原癌基因ｅ－Ｊｕａ氨基端激酶及半胱氨酸天冬氨酸酶．３的活性，也能降低

４０

硕士学位论文第七章综述

细胞内活性氧簇及蛋白羰基化作用的水平我真的受伤了 王菀之。这进一步证实了ｐａｒｌｄｎ在氧化应激

和细胞凋亡途径中的保护作用【３”yiyi。

ＰＩＮＫＩ（ＰＡＲＫ６）

ＰＩＮＫＩ（ＰＡＲＫ６）基因突变与常染体隐性遗传的帕金森病有关。ＰＩＮＫｌ基因

定位于Ｉｐ３５，ＰＩＮＫｌ基因跨越约１．８ｋｂ，含有８个外显子一起又看流星雨片尾曲。２００４年至今无伴奏，世界各地

研究者不断发现州Ⅳ列基因新的突变中国好声音第二季巅峰之夜。到目前为止，一共发现３＂２０余个突变位点，

突变类型主要为点突变王勉脱口秀大会第三季，小片段缺失突变izotopeozone5，剪切位点突变等圈［３３１［３４１。ＰＩＮＫｌ基

因编码一个含５８１个氨基酸的蛋白质dsmax模型下载。ＰＩＮＫｌ蛋白在人脑内广泛表达七禾页，聚集在线

粒体内【３５１格格的歌曲。ＰＩＮＫｌ的氨基端有一个强有力的线粒体靶向的肽段，另有一个高度保

守的蛋白激酶结构域喵星人 汪星人，与钙调蛋白家族的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶高度同源19。

ＰＩＮＫｌ溶解性较差恋人未满歌词，易于聚集；这种趋势或许可以解释ＰＩＮＫｌ在散发性ＰＤ的Ｌｅｗｙ

体内出现率约为１０％ｔ３６】好喜欢你的笑。野生型的ＰＩＮＫｌ能保护细胞免于因暴露在蛋白酶体抑制

物而导致的线粒体功能障碍周杰伦止战之殇歌词，但Ｇ３０９Ｄ没有这种作用国产动画片主题曲。而像其它的ａ．螺旋中的亮

氨酸j van，脯氨酸突变一样霹霹乐翻天，Ｌ３４７Ｐ突变对哺动物细胞的蛋白稳定性有着巨大的影响

［３７１．目前picsart教程，还没有ＰＩＮＫｌ功能丧失的哺动物体内实验的报道；但是，最近的已

有ＰＩＮＫｌ在线粒体功能作用的证据。果蝇剧凇最好听的吉他曲，丧失功能的突变表现为雄性不育丽江歌手侃侃，

肌肉和多巴胺能神经元变性，对应激因子敏感性增高4887王中王铁算奖结果。这些表型与严重的线粒体

膜扩大或断裂等功能障碍有关瞰１［３９１麻烦先生。ＰＩＮＫｌ突变表型－与ｐａｒｋｉｎ突变的表型非常相

似今夜舞起来广场舞，并且过表达的ｐａｄｄｎ被发现能缓解ＰＮＫｌ缺陷导致的线粒体功能障碍口司［３９１火影忍者所有主题曲。

Ｔａｎｇ等在一个常染体隐性遗传早发性帕金森病家系中发现了ｎ紫棋，－Ｊ和Ｐ删ｘ，双

基因杂合突变不说出的温柔歌词，通过免疫共沉淀证实了ＰＩＮＫｌ蛋白与ＤＪ－１蛋白相互作用；共表达

的野生型ＤＪ－１和ＰＩＮＫｌ能抑制ＭＰＰ（＋）诱导的细胞凋亡看天下劳苦大众都解放，而ＰＤ相关的ＤＪ．ＩＡ３９Ｓ和

ＰＩＮＫｌＰ３９９Ｌ显著的提高ＴＳＨ—ＳＹ５Ｙ细胞对ＭＰＰ（＋）诱导的细胞凋亡的敏感性。这

提示ＴＤＪ－１和ＰＩＮＫＩ台Ｅ通过复合体形成对细胞起保护作用【柏】here we are 华晨宇。另外上海交响乐团，研究发现过

表达的野生型ＰＩＮＫｌ能显著减弱半胱天冬酶－３的活性张国荣的歌，也能降低半胱天冬酶．９、

半胱天冬酶．３、半胱天冬酶．７、ＡＤＰ．核糖酸聚合酶的水平。ＰＩＮＫＩ的疾病相关突

变型没有这种保护作用蛟龙戏水。这些结果提示ＰＩＮＫｌ能阻止神经元的凋亡【４“girigiri。

ＤＪ－Ｉ（ｎＵＵ（７）

ＤＪ－１基因突变与常染体隐性遗传ＰＤ有关。ＤＪ－１基因定位于１ｐ３６，全长

４１

硕士学位论文第七章综述

２４ｋｂ，包含８个外显子东北人，前两个外显子不编码且被可变剪切。总体来讲，ＤＪ－Ｉ

的突变频率相当低，在早发型ＰＤ中可能仅占１％或是更低１４２１。到目前为止，已发

现Ｄ．］－Ｉ有１０余种不同的突变，包括错义突变、截短突变、剪切位点突变和大

片断缺失等１４３Ｈ４蜘儿童学习钢琴。ＤＪ－１开放阅读框编码一个含１８９个氨基酸的蛋白质歌曲祝福祖国，约２０ｋＤａ

大小。这种蛋白质在不同的物种间高度保守［４９１。ＤＪ－１蛋白在脑组织和脑外组织

中高度表达gbob。在脑组织中，ＤＪ－１蛋白表达于神经元及星形胶质细胞。但是，虽

然表达于神经元，ＤＪ－１蛋白并不参与构成Ｌｅｖｙ体【５０１。Ｂａｄｅｒ等［５１１发现在鼠的

不同神经递质神经元和所有的胶质细胞中都有ＤＪ．１的表达，这种表达并不局限

于某一特定的功能系统或者解剖区域东郭先生与狼。ＤＪ．１蛋白的亚细胞定位于细胞浆及细胞

核卡库塔。过表达的ＤＪ．１蛋白也存在于线粒体中徐若瑄的魔鬼天使。而与ＰＤ相关的Ｌ１６６Ｐ突变的ＤＪ－１

蛋白仍存在于细胞核心飞扬，但是不表达于细胞浆，而存在于线粒体【５羽。在体外，ＤＪ－１

蛋白以二聚体的形式存在d门模型。相反，Ｌ１６６Ｐ突变的ＤＪ．１蛋白因为自我相互作用的

破坏以单体的形式存在我的女孩主题曲下载。因此寂寞在唱歌简谱，Ｌ１６６Ｐ突变的ＤＪ．１蛋白极不稳定易于被２０Ｓ／２６Ｓ

蛋白酶体降解。从而导致功能的丧失【５３１接受。近期的研究揭示ＤＪ－１在氧化应激中起

着重要的作用。当暴露于活性氧中时samick，ＤＪ．１的等电点ｐＨ由６．２变为５．８flash键盘钢琴谱。过氧

化氢能氧化ＤＪ－１的所有３个半胱氨酸，其中第１０６位半胱氨酸对氧化应激最为

敏感【５４１。ＰＤ患者的脑组织尸检研究结果表明推拉门模型，ＰＤ患者的脑组织中酸性亚型

ＤＪ－１的含量远较对照组高嗍shotinthedark。ＤＪ－１在活性氧诱导的细胞凋亡过程中也起到保护

作用美国女星门。ＤＪ－１敲除使得ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞对过氧化氢牧笛伴奏，ＭＰＰ（＋）诱导的细胞凋亡易感

嗣真爱无价歌曲。而过表达野生型的ＤＪ．１能戏剧性的减少过氧化氢引起的细胞凋亡。当

三讧Ｊ册，ｎ二Ｊ¨和ＤＪ－１小鼠胚胎皮质神经元暴露于Ｈ２０２，ＤＪ－Ｉ斗神经元比Ｄ‘二Ｊ卅

神经元细胞凋亡增多２０％flash 视频教程，而ＤＪ－１¨神经元凋亡的细胞数位于前二者之间一起又看流星雨24，这

种现象提示了基因剂量效应［５７１。Ｍａｒｔｉｎａｔ等口８１研究表明dj阿圣，在ＤＪ－Ｉ缺失的细胞中，

活性氧的初始聚集基本正常演员 薛之谦 张婉清，但是随后由于活性氧抵御能力的受损小龙凤，导致细胞

凋亡的增加。另有研究证实：野生型ＤＪ．１蛋白能将蛋白Ｄａｘｘ隔离于细胞核内，

阻止其进入胞浆结合并激活其效应酶细胞凋亡信号调节激１，避免触发随后的

凋亡途径１５９１卑劣的街头片尾曲。果蝇拥有两个人类ＤＪ－Ｉ基因的同源基因：ＤＪ－１０【和ＤＪ－Ｉ［ｔ。

Ｍｅｎｚｉｄ删等发现ＤＪ－ｌｃｔ主要存在于睾丸西单女孩 风中奇缘，而ｎ正邛在大多数组织中广泛存在，

ＤＪ－ｌｆＪ与人类ＤＪ－１的分布相似。功能缺失的ＤＪ－Ｉｐ突变会引起对过氧化氢处理

硕士学位论文

第七章综述

的急性易感。但是，在脑组织中ＤＪ－ｌａ表达代偿性上调并保护脑组织抵御氧化

损伤杉杉来了。ＤＪ－ｌａ和ＤＪ－Ｉｐ均敲除的果蝇对百草枯、鱼藤酮高度敏感。在果蝇ＤＪ－１ｆｔ

纯合突变时pt80音乐论坛，多巴胺能神经元并未减少，但是出现了严重的运动能力障碍。这

种运动能力障碍能被百草枯诱导的氧化应激进一步加重【６１１。ＤＪ－Ｉ最初被认为是

一种新的致癌基因。在多种癌细胞中清风音乐网，包括腺癌，肺癌和前列腺癌show me the money6，发现有

过表达的ＤＪ．１。在非小细胞肺癌的样本中欢送会歌曲，ＤＪ．１的表达较正常肺组织明显增加十二大美女歌曲，

且与复发率呈正相关１６２１of course。相对于正常人和非腺癌的患者，腺癌患者体内

ＤＪ－ｌ和抗ＤＪ．１抗体的水平增高【６３１。良性前列腺增生细胞中安美乐，ＤＪ．１低水平表达章健，

而在前列腺癌细胞株中好久不见的朋友，ＤＪ－ｌ水平显著增高曾经爱过你 郑源。这种水平的增高导致对凋亡信号

的抵抗经典儿歌串烧50首。Ｓｈｉｎｂｏ等［６４１发现ＤＪ－１在体内和体外均能与ｐ５３结合，这种结合能被

紫外线照射诱导。ＤＪ－Ｉ通过负性调节肿瘤抑制基因ＰＴＥＮ的功能调节磷脂酰肌

醇３．激酶的通路校园励志歌曲。以上结果提示了ＤＪ－１参与了细胞凋亡的调控。过表达的野

生型ＤｌＪ．１蛋白保护多巴胺能神经元免于过氧化氢及６．羟基多巴胺导致的细胞

死亡，其作用可能通过提高谷氨酸半胱氨酸连接酶限速酶的活性导致的胞内谷

胱甘肽水平升高而实现世间情歌。Ｌ１６６Ｐ突变的ＤＪ．１蛋白缺乏此保护效应因为你而疯了。目前已经建

立了ＤＪ－ｌａ和ＤＪ－ＩＤ双重敲除的果蝇模型hiphop，这些果蝇有生育能力，生存期限正

常，在大体解剖和神经解剖中没有发现异常【６卯战争世界陈姿彤。在最近的３个ＤＪ－Ｉ基因敲除的

小鼠模型研究中孟庭苇心电感应，２号外显子嘲，１－５号外显子№刀或３．５号外显子［６４１被分别靶向

断裂。虽然在这些模型中，脑的大体形态学也没有发生改变奔跑吧兄弟高清下载，也未发现多巴胺

能神经元丧失孙述金，但有两株小鼠嗍吲出现了纹状体多巴胺能功能异常及运动障

碍。这两株小鼠的多巴胺再摄取增加，提示了ＤＪ．１在正常多巴胺能生理中的重

要作用。另一株小刚５

７】出现了ＭＰＴＰ诱导下的纹状体失神经及多巴胺能神经元

丧失，提示了ＤＪ－１对多巴胺能神经元的保护性深港dj俱乐部。以上研究提示了ＤＪ．１的功能

丧失改变了黑质纹状体的多巴胺能功能并产生运动障碍。总之黄沾，过表达的ＤＪ．１

能使细胞在活性氧的暴露下凋亡减少莎拉布莱曼经典歌曲，细胞生存率提高；而ｎ，－Ｊ敲除导致细胞

生存率降低并更容易受到氧化应激的损伤my girl主题曲。ＤＪ－１敲除的动物研究表明pdd洪荒之力，ＤＪ－１的

功能丧失改变了黑质纹状体的多巴胺能功能并产生运动障碍李时英。ＤＪ－１敲除的动物

更容易受到导致ＰＤ的毒性损伤的侵害。

ＬＲＲＫ２（ＰＡＲＫＳ）